針刺“足三里”穴對(duì)端粒酶基因敲除小鼠海馬區(qū)TRKB--ERK信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察不同基因型和不同月齡端粒酶基因敲除小鼠(telomerase-deficient，Terc-/-)行為學(xué)變化特點(diǎn)，并在此基礎(chǔ)上研究針刺足三里穴對(duì)Terc-/-小鼠海馬區(qū)TRKB-ERK信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響。
　　方法:1.選用第3代Terc-/-小鼠，在小鼠3-4周齡時(shí)進(jìn)行分籠、采血，經(jīng)PCR法基因鑒定小鼠基因型。篩選出Terc-/-和野生型小鼠，隨機(jī)選出2月齡、3月齡、5月齡、7月齡及9月齡小鼠各8只，共40只。對(duì)不

2、同月齡Terc-/-和野生型小鼠進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)。檢測(cè)完成后，對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，觀察Terc-/-和野生型小鼠隨月齡增長(zhǎng)其行為學(xué)變化特點(diǎn)。2.分別取24只7月齡Terc-/-和野生型小鼠，隨機(jī)分為空白組、手針組和電針組，每組各8只，共48只?？瞻捉M在相同環(huán)境下飼養(yǎng)，僅模擬抓握;手針組取雙側(cè)足三里穴直刺約1.5mm，手針刺激30min，每5分鐘行捻轉(zhuǎn)手法一次，每天1次，連續(xù)干預(yù)7天;電針組取雙側(cè)足三里穴直刺約1.5mm，電針刺激30min

3、，交替波，頻率為2/50Hz，強(qiáng)度為2mA，每天1次，連續(xù)干預(yù)7天;干預(yù)結(jié)束后次日取腦組織，采用免疫組化法及免疫印跡法檢驗(yàn)TRKB、ERK、P-ERK和NF-kB蛋白在海馬區(qū)的表達(dá)。
　　結(jié)果:1.Morris水迷宮:與野生型小鼠相比，Terc-/-小鼠隨月齡增長(zhǎng)其潛伏期逐漸延長(zhǎng)，逃避潛伏期的目標(biāo)象限時(shí)間比逐漸減小，兩組間在2、3和5月齡時(shí)無(wú)顯著差異(p＞0.05)，但在7和9月齡時(shí)有顯著差異(p＜0.05)。2.自主活動(dòng)測(cè)試:與

4、野生型小鼠相比，Terc-/-小鼠在2、3和5月齡時(shí)的自主活動(dòng)均無(wú)顯著差異(P＞0.05)，但在7和9月齡時(shí)兩組間出現(xiàn)顯著差異(P＜0.05)。3.老化度評(píng)分:與野生型小鼠相比，Terc-/-小鼠的評(píng)分值在2、3月齡時(shí)無(wú)顯著差異(p＞0.05)，在5、7和9月齡時(shí)顯著增高(P＜0.05)。4.免疫組化法結(jié)果:(1)干預(yù)后Terc-/-小鼠海馬區(qū)TRKB蛋白陽(yáng)性目標(biāo)面密度:空白組(0.0233±0.007)、手針組(0.0312±0.00

5、5)、電針組(0.0363±0.007)，電針組與空白組比較，差異具有顯著性(P＜0.05);Terc-/-小鼠海馬區(qū)ERK蛋白陽(yáng)性目標(biāo)面密度:空白組(0.0148±0.074)、手針組(0.0270±0.010)、電針組(0.0201±0.008)，手針組與空白組比較，差異具有顯著性(P＜0.05)。5.免疫印跡法結(jié)果:(1)干預(yù)后Terc-/-小鼠海馬區(qū)TRKB蛋白相對(duì)體積:空白組(0.6940±0.249)、手針組(0.9525±

6、0.139)、電針組(0.9801±0.129)，手針組和電針組與空白組比較，差異均具有顯著性(P＜0.05)。Terc-/-小鼠海馬區(qū)NF-kB蛋白相對(duì)體積:空白組(0.2891±0.070)、手針組(0.4066±0.126)、電針組(0.4856±0.066)，手針組和電針組與空白組比較，差異均具有顯著性(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.與同齡野生型小鼠相比，Terc-/-小鼠隨月齡增長(zhǎng)其行為活動(dòng)出現(xiàn)顯著增齡性變化，Terc