HSP70在TGF-β信號轉導中的作用.pdf

1、Nodal/TGF-β信號通路是TGF-β超家族的成員，在脊椎動物胚胎發(fā)育、組織分化、維持穩(wěn)態(tài)，以及細胞的凋亡、遷移疾病的發(fā)生等生理病理過程中起著至關重要的作用。
　　 作為Nodal/TGF-β信號通路中的重要元件，Smad2 會與很多協(xié)同作用蛋白以及轉錄因子結合調(diào)控Nodal/TGF-β信號通路，從而影響下游靶基因的表達。這些蛋白和Smad2的相互作用直接影響著TGF-β信號的轉導和調(diào)控過程。
　　 為了鑒定一些新的

2、Smad2 結合因子，本文利用GST-Smad2 融合蛋白為誘餌，使用GST pull down assay 技術分離其潛在的結合蛋白。采用質(zhì)譜技術分析蛋白組分發(fā)現(xiàn)了MDM2 結合蛋白MTBP和熱休克蛋白HSP70。蛋白質(zhì)免疫共沉淀的結果表明，HSP70不僅可以與斑馬魚Smad2 相互作用，還可以與人Smad2 結合，而且體外翻譯的兩種蛋白也存在相互作用。熒光素酶報告基因?qū)嶒灥慕Y果發(fā)現(xiàn)，過表達HSP70對于Smad2 介導的TGF-β信

3、號通路有著明顯的抑制作用，而HSP70抑制劑和HSP70siRNA 均可以上調(diào)信號轉導，證明了HSP70對Smad2 介導的TGF-β信號存在負調(diào)控作用。
　　 進一步的研究發(fā)現(xiàn)，HSP70在TGF-β刺激前后均在細胞質(zhì)中表達，使用持續(xù)激活TGF-βI 型受體激活信號通路，HSP70與Smad2的結合沒有受到明顯的影響。但是過表達HSP70可以導致HEK293細胞內(nèi)源Smad2 磷酸化水平明顯降低，更重要的是，本研究還發(fā)現(xiàn)HSP

4、70可以阻滯TGF-β刺激誘導的Smad2 進入細胞核過程。
　　 結合檢測上皮細胞向間充質(zhì)細胞轉化的實驗，發(fā)現(xiàn)了過表達HSP70可以阻礙TGF-β誘導的上皮細胞向間充質(zhì)細胞轉化，這一結果也充分說明了HSP70對TGF-β信號的負調(diào)控作用，而且還說明這種負調(diào)控會影響一些和TGF-β信號有關的重要生理進程。
　　 TGF-β信號在腫瘤發(fā)生早期具有抑制細胞增生的作用。而在腫瘤組織中，HSP70比正常組織有高水平表達。本文發(fā)現(xiàn)