HSP70在星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷后反應(yīng)性增生中的作用.pdf

1、目的：探討HSP70對星形膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性增生及BDNF表達(dá)的影響，并進(jìn)一步明確HSP70在膠質(zhì)瘢痕形成中的作用。 方法：從新生大鼠大腦皮層中分離培養(yǎng)并純化星形膠質(zhì)細(xì)胞，采用抗GFAP的免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法來鑒定細(xì)胞純度。用劃痕損傷法制備星形膠質(zhì)細(xì)胞體外損傷模型，并將細(xì)胞分為三組。正常組：正常培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞，不做損傷及其他任何處理；損傷對照組：細(xì)胞損傷后立即在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入無菌PBS；損傷干預(yù)組：細(xì)胞損傷后立即在細(xì)胞培養(yǎng)基中

2、加入HSP70抗體。分別對正常組以及損傷后30min，24h，4d，7d的損傷對照組和損傷干預(yù)組進(jìn)行GFAP和BDNF免疫細(xì)胞化學(xué)染色，觀察細(xì)胞增生情況，分析圖象平均光密度值及細(xì)胞形態(tài)學(xué)參數(shù)。并在上述時間點(diǎn)分別提取各組細(xì)胞的總RNA，用RT-PCR方法檢測不同時間點(diǎn)GFAPmRNA及BDNFmRNA的表達(dá)。 結(jié)果： (1)所培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)鑒定，純度達(dá)97.83％；(2)采用劃痕損傷的方法建立的星形膠質(zhì)細(xì)胞體外損傷模型與國內(nèi)

3、外其它星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷模型中細(xì)胞增生的時間和形態(tài)特點(diǎn)基本一致；(3)GFAP免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示，損傷干預(yù)組與損傷對照組相比，Ast增生明顯減少，平均細(xì)胞面積、平均細(xì)胞突起數(shù)目及突起長度均減小(P＜0.05)。BDNF免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示，損傷干預(yù)組與損傷對照組相比，平均光密度值明顯降低(P＜0.05)。(4)RT-PCR結(jié)果顯示，與損傷對照組相比，損傷干預(yù)組GFAPmRNA及BDNFmRNA的表達(dá)明顯降低(P＜0.05)。