HSP70基因轉(zhuǎn)染對燒傷后腸黏膜缺血缺氧性損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探討重組腺病毒介導(dǎo)的外源性HSP70基因轉(zhuǎn)染對嚴(yán)重?zé)齻竽c黏膜缺血缺氧性損傷的保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制.通過該重組腺病毒載體微膠囊化效應(yīng)的觀察,率先以口服轉(zhuǎn)染的新途徑探討其對嚴(yán)重?zé)齻笫竽c黏膜缺血缺氧性損傷的保護(hù)作用,從而為進(jìn)一步臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ).一、該實(shí)驗(yàn)利用DNA-TPC方法成功制備含全長HSP70基因的復(fù)制缺陷型重組腺病毒載體(Ad-HSP70),并通過點(diǎn)突變修復(fù)、目的基因插入方向鑒定等方法的改進(jìn),提高了該腺病毒載

2、體制備效率.(時(shí)間縮短為1-2月),并通過應(yīng)用腺病毒末端DNA-TPC重組方法,提高了腺病毒液滴度.(獲得的病毒液滴度為3.57×10<'10>pfu/ml,遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)方法1×10<'9>pfu/ml)二、通過Ad-HSP70體外轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)證實(shí)重組腺病毒介導(dǎo)的HSP70基因過度表達(dá)對體外培養(yǎng)的腸上皮細(xì)胞缺血缺氧性損傷有保護(hù)作用,可保護(hù)腸上皮細(xì)胞活性,具體機(jī)制與減輕腸上皮細(xì)胞調(diào)亡與壞死率,維持腸上細(xì)胞增殖能力有關(guān).三、重組腺病毒載體Ad-H

3、SP70經(jīng)微膠囊化后可體外存活擴(kuò)增,躲避胃液損傷,并在人工腸液中35分后即可半數(shù)以上融出,可進(jìn)行口服轉(zhuǎn)染.四、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提示通過靜脈注射轉(zhuǎn)染與腹腔注射轉(zhuǎn)染Ad-HSP70可成功誘導(dǎo)目的基因高表達(dá),減輕大鼠腸黏膜損傷指數(shù)、減少血清中細(xì)胞因子及內(nèi)毒素產(chǎn)生,從而可望減輕嚴(yán)重?zé)齻笕硇匝装Y反應(yīng)與多器官功能衰竭的發(fā)生.五、我們在實(shí)驗(yàn)中率先應(yīng)用微膠囊化Ad-HSP70腺病毒載體口服轉(zhuǎn)染大鼠,證實(shí)在腸道有確切吸收并在腸黏膜與心肌中檢測到目的基因的高表