棉花增強子捕獲系群體的創(chuàng)建與初步分析.pdf

1、分類 號華 中農(nóng)業(yè)大學碩 士學位論文棉花增 強子捕獲系群體 的創(chuàng)建 與初步分析C o n stru c tio na n dA n a ly siso fC o tto nE n h a n e e rtra PP o P u la tio n研 究 生 : 魏艷梅指 導 教 師 : 張獻龍 教授指 導 小 組 : 張獻 龍 教 授林擁 軍 教授聶 以春 教授郭小平 教授專業(yè) : 作物遺 傳 育種獲得 學位 名 稱 : 農(nóng) 學碩 士研

2、究方 向: 棉花分 子 生物 學獲得 學位 時 間 : 2008 年 6 月 26 日華 中農(nóng)業(yè)大學植物 科 技學 院二 0 0 八年六 月棉花增 強 子捕 獲系群體 的創(chuàng) 建與初步分析2. 1. 3 部分試劑來源 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

3、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …28‘ 2. 1. 4 培養(yǎng)條件及其不同培養(yǎng)基配方 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … … ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …292.1. 5 緩沖 液和 培 養(yǎng)基 配 方 . .

4、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …302. 2 實驗 方 法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

5、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……302. 2.1 以棉 花下 胚 軸 為受體 的遺 傳 轉(zhuǎn) 化 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

6、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… ， .302. 2.2 轉(zhuǎn) 化 愈傷 及 再 生植株 不 同器 官 的 G U S 染色 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……犯2.2. 3 轉(zhuǎn) 化材 料 的分子 鑒 定 . . . . . . . . . . . . .

7、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……322.2.4 轉(zhuǎn)基 因 當代材 料 的農(nóng) 藝性狀 考 察 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

8、. . . . . . . . . . . . . . . . . … …342.2.5 采用 TA IL一 PC R 、PC R ，厄 I king 方法擴增棉 花 不D NA 側(cè) 翼序 列 。 二 343 結(jié) 果 與分析 . ……， . … …， 二 ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

9、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …393.1 棉花下胚軸 轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基 因株 系 的獲得 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …

10、…393. 2E nh aneert raP TO 代 群 體 G U S 檢測 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …393. 2.1G U S 基 因在 突變 群 體 的表達 頻率 . . . . . . . . . . . . . . .

11、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …393. 2. 2G U S 基 因在 不 同體細 胞胚 胎 發(fā)育 階 段 中的表 達 頻率 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …403. 2. 3G U S 基 因在根 中 的表達 模 式 . . . . . . . . . . . . .

12、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……403. 2.4G U S 基 因在花 器 官 中的表 達模 式 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

13、. . . . . … …413. 3 轉(zhuǎn)基 因再生植株 的 PC R 檢測 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……433. 4 轉(zhuǎn)基 因再 生植株 的農(nóng) 藝性狀考 察 . . . . . . . . . .

14、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……科3. 5 采用 T A IL一 Pc R 、PC R 一 w 確 ng 的方法擴 增 棉花 T 一 DN A 側(cè) 翼序列 . . … …473. 5. 1 運 用 T A IL一 Pc R 方 法 擴增 T-D N A 側(cè) 翼 序

15、 列 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……473. 5. 2 運 用 PC R 漸陽 I king 方法 擴 增 T-D N A 側(cè) 翼序 列 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……474 討 論 . . . . . . . . . . . . . .

16、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……514 .1E nh ancertr

17、 ap 系 統(tǒng) 的有 效性 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …514.2 關于 T 一 D N A 插 入 飽和 突變 體 庫 的構(gòu) 建 . . . . . . . . . . . .

18、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……514.3G U S 基 因表 達 的時空特 性 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

19、. . . . . . . . . . . . . . . ……524.4 T 一 D N A 側(cè) 翼序 列 的分離 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……53參 考 文

20、 獻 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …55致 謝 . . .

21、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .