馬鈴薯增強(qiáng)子捕獲系的創(chuàng)建及鑒定.pdf

1、馬鈴薯已在2014年成為我國作為重要的戰(zhàn)略儲備主糧之一，而馬鈴薯的測序工作也于2011年7月完成。測序的馬鈴薯材料為雙單倍體馬鈴薯材料DM1-3-516-R44(DM)和雜合二倍體馬鈴薯材料RH89-039-16(RH)?；跍y序成功的基礎(chǔ)上，世界各國對馬鈴薯相關(guān)功能基因組學(xué)的研究將全面展開。本研究利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法，將已成功構(gòu)建的增強(qiáng)子捕獲T-DNA雙元載體導(dǎo)入馬鈴薯植株中，從而獲得轉(zhuǎn)基因植株，并對突變株系進(jìn)行篩選和分析。

2、同時結(jié)合已經(jīng)發(fā)布的馬鈴薯基因組的測序數(shù)據(jù)，開展對馬鈴薯功能基因組學(xué)的研究。為后續(xù)建立增強(qiáng)子捕獲系奠定基礎(chǔ)，并加快馬鈴薯功能基因的相關(guān)研究。
　　本研究在兩年時間內(nèi)取得了以下進(jìn)展：
　　1.創(chuàng)建了雙單倍體馬鈴薯DM的再生體系。對馬鈴薯莖段、葉片進(jìn)行脫分化、再分化直接得到健康植株。用于馬鈴薯莖段愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為（MS+IAA0.5mg/L+6-BA2.5mg/L）；用于馬鈴薯葉片愈傷組織發(fā)生的培養(yǎng)基為(MS+NAA1.0m

3、g/L+6-BA1.0mg/L)；用于馬鈴薯愈傷組織分化不定芽的培養(yǎng)基為（MS+6-BA2mg/L+GA30.1mg/L）。
　　2.創(chuàng)建了雜合二倍體馬鈴薯RH的再生體系。對馬鈴薯莖段、葉片進(jìn)行脫分化、再分化直接得到健康植株。用于馬鈴薯莖段愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為（MS+2,4-D0.5mg/L+ZT1.0mg/L）；用于馬鈴薯葉片愈傷組織發(fā)生的培養(yǎng)基為(MS+NAA1.0mg/L+ZT1.0mg/L)；用于愈傷組織分化不定芽的培養(yǎng)

4、基為（MS+ZT2mg/L+GA310mg/L）。
　　3.優(yōu)化了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化雙單倍體馬鈴薯 DM的條件。將馬鈴薯莖段、葉片放入愈傷組織誘導(dǎo)預(yù)培養(yǎng)基中培養(yǎng)10d；利用OD600為0.3的農(nóng)桿菌侵染10min，并放入愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中共培養(yǎng)3d；將共培養(yǎng)的組織清洗后放入含有300mg/L的頭孢噻肟鈉(Cef)和8mg/L的潮霉素(Hyg)的愈傷組織誘導(dǎo)預(yù)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)10d即得到較好的愈傷組織；將較好的愈傷組織放入含有相應(yīng)抗生素的分化培