2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
已閱讀1頁，還剩59頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、目的：①構(gòu)建hMAM基因啟動子和增強子序列調(diào)控報告基因EGFP的重組腺病毒。②構(gòu)建hMAM基因啟動子和增強子序列調(diào)控自殺基因HSV-TK的重組腺病毒。③驗證hMAM啟動子和增強子調(diào)控機制的乳腺癌細胞特異性。④探討hMAM啟動子和增強子調(diào)控自殺基因HSV-TK靶向治療乳腺癌的方法。
　　 方法：⑴根據(jù)Genebank提供的序列合成hMAM啟動子和增強子(EP)DNA并構(gòu)建至質(zhì)粒載體pMD19-T simple。⑵分別將報告基因EG

2、FP和自殺基因HSV-TK構(gòu)建于EP序列下游，獲得含目的基因EP-EGFP和EP-TK的兩種重組質(zhì)粒pMD19-T-EP-EGFP和pMD19-T-EP-TK。⑶分別將目的基因轉(zhuǎn)移到腺病毒骨架粘粒載體pAxcwit2并包裝獲得兩種重組腺病毒粘粒pAxcwit2-EP-EGFP和pAxcwit2-EP-TK。⑷重組粘粒線性化并轉(zhuǎn)染HEK293細胞，包裝獲得重組腺病毒Ad-EP-EGFP和Ad-EP-TK。⑸將含重組腺病毒Ad-EP-EGF

3、P分別感染體外培養(yǎng)的各細胞株：表達hMAM的乳腺癌細胞T-47D、不表達hMAM的乳腺癌細胞ZR-75-30和鼻咽癌細胞5-8F。熒光顯微鏡下觀察報告基因GFP表達情況，驗證hMAM基因啟動子和增強子基因表達調(diào)控作用的乳腺癌細胞特異性。⑹分別將重組腺病毒載體Ad-EP-EGFP和Ad-EP-TK感染體外培養(yǎng)的各細胞株：表達hMAM的乳腺癌細胞T-47D、不表達hMAM的乳腺癌細胞ZR-75-30和鼻咽癌細胞5-8F，并予前藥更昔洛韋治療

4、。另設(shè)不予病毒感染的上述三種細胞予同樣濃度前藥為對照組。觀察hMAM基因啟動子和增強子序列調(diào)控自殺基因HSV-TK對乳腺癌細胞的靶向殺傷作用。
　　 結(jié)果：①酶切、測序、轉(zhuǎn)染等驗證，兩種重組腺病毒構(gòu)建成功。②熒光顯微鏡下顯示，重組腺病毒Ad-EP-EGFP感染后，在不表達hMAM的乳腺癌細胞ZR-75-30和鼻咽癌細胞5-8F中無GFP表達，乳腺癌細胞T-47D中有表達。③hMAM基因啟動子和增強子序列調(diào)控的自殺基因HSV-TK

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論