RSOD基因的合成及其蘋果的遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、植物分子育種可以通過提高植物的抗病、蟲、雜草能力及非生物脅迫抗性來提高植物的產(chǎn)量。近年來，利用植物作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)蛋白質(zhì)在工業(yè)和臨床應(yīng)用上越來越受到重視。通過這種方式已經(jīng)生產(chǎn)了多種重組酶類和抗體。僅從經(jīng)濟(jì)角度來考慮，植物生物反應(yīng)器與發(fā)酵相比較而言生產(chǎn)成本要低的多。植物生長發(fā)育僅需要太陽能、CO<,2>和一些無機(jī)肥料，而發(fā)酵卻需要昂貴的儀器設(shè)備、電能和培養(yǎng)基。目前，植物生物反應(yīng)器已經(jīng)從理論研究轉(zhuǎn)向商業(yè)探索，并且其表達(dá)水平已經(jīng)達(dá)到了和細(xì)菌

2、、酵母及動物細(xì)胞培養(yǎng)相提并論的程度。 人的SOD作為一種重要的醫(yī)藥和化妝品原料，有著重要的商業(yè)價值。本論文通過對人Cu／Zn-SOD基因的改造(改造后命名為RSOD)，旨在提高該基因在轉(zhuǎn)基因植物中的表達(dá)量和穩(wěn)定性。該基因的改造包括：使用植物偏愛密碼子，在其3端引入一段內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列(KDEL)，在5端引入煙草分泌信號肽序列(PR-S)。本研究通過PTDS基因合成技術(shù)完成了人Cu／Zn-SOD基因的拼接，產(chǎn)物克隆及全長基因的核苷酸

3、全序列測定。然后構(gòu)建了兩個分別由CaMV35S啟動子和番茄果實(shí)特異性PG基因啟動子控制RSOD基因表達(dá)的植物雙元載體。最后通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，用CaMV35S啟動子控制RSOD基因表達(dá)的植物雙元載體轉(zhuǎn)化擬南芥，用番茄果實(shí)特異性PG基因果實(shí)特異性啟動子控制RSOD基因表達(dá)的植物雙元載體轉(zhuǎn)化蘋果。 利用農(nóng)桿菌蘸花法共獲得了21株擬南芥陽性植株，GUS染色和PCR鑒定結(jié)果初步表明，外源基因已經(jīng)整合入轉(zhuǎn)基因擬南芥基因組中。RT-PCR分析