ASACC基因轉(zhuǎn)化‘新紅星’蘋果的研究.pdf

1、本研究以蘋果品種‘新紅星’(‘starkrimson’)為試材，建立了其高效再生體系，為‘新紅星’蘋果遺傳轉(zhuǎn)化研究打下基礎(chǔ)。采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將ASACC基因轉(zhuǎn)入‘新紅星’蘋果中，以期獲得含有ASACC基因的、耐貯藏的‘新紅星’蘋果新種質(zhì)。研究結(jié)果如下： 1．研究了基本培養(yǎng)基類型、激素種類和濃度、外植體類型、暗處理時(shí)間以及葉片放置方式對‘新紅星’蘋果再生頻率的影響，結(jié)果表明：三種外植體的最適基本培養(yǎng)基均為MS培養(yǎng)基；TDZ的誘導(dǎo)效

2、果強(qiáng)于6-BA，最佳濃度配比為MS+TDZ 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6.0 g/L；葉片的再生效果最好，其次為白化莖段，莖段最差，葉片和莖段的最佳暗處理時(shí)間為3周，白化莖段的最佳暗處理時(shí)間為2周。葉片放置方式對‘新紅星’蘋果再生頻率影響不大。 2．應(yīng)用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，以‘新紅星’蘋果的葉片為受體材料，進(jìn)行了不同選擇壓、農(nóng)桿菌侵染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間、抑菌素種類和濃度等遺傳轉(zhuǎn)化影響因素的研究，建

3、立的‘新紅星’蘋果遺傳轉(zhuǎn)化體系為：葉片經(jīng)農(nóng)桿菌侵染4 mm、在含TDZ1.0 mg/L，NAA0.3 mg/L的MS培養(yǎng)基上黑暗共培養(yǎng)3 d、添加250 mg/LCef，能獲得最佳的GUS基因瞬時(shí)表達(dá)率為35.6％。最佳的選擇壓為Km12.5mg/L。 3．在利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法的基礎(chǔ)上，采用SAAT法，對‘新紅星’蘋果遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行了優(yōu)化，以期提高轉(zhuǎn)化效率。利用GUS基因瞬時(shí)表達(dá)的方法研究了共培養(yǎng)時(shí)間、超聲波處理功率；處理時(shí)間、

4、及農(nóng)桿菌懸浮液中乙酰丁香酮(AS)濃度對蘋果基因轉(zhuǎn)化效率的影響。結(jié)果表明：葉盤在OD<,600>為0.6時(shí)且含有75mg/LAs的農(nóng)桿菌懸浮液中侵染4 min，在此期間，用功率為80 w的超聲波處理40 s，然后放到‘新紅星’蘋果的再生培養(yǎng)基上共培養(yǎng)3 d，獲得最佳的GUS基因瞬時(shí)表達(dá)率為75.6％。 4.利用GUS組織化學(xué)染色、PCR擴(kuò)增的方法對‘新紅星’蘋果的km抗性植株進(jìn)行檢測，結(jié)果初步表明，ASACC基因已經(jīng)整合進(jìn)其中的