干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化與繼發(fā)腫瘤形成的關(guān)系研究.pdf

1、目前，腫瘤轉(zhuǎn)移（tumor metastasis）是造成癌癥患者死亡的首要原因。經(jīng)典的腫瘤轉(zhuǎn)移理論認(rèn)為，癌轉(zhuǎn)移是由原發(fā)癌組織中的某些細(xì)胞浸潤到其下方結(jié)締組織，完成上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)變（epithelial-mesenchymal transition，EMT）通過血道或者是淋巴管道，擴散到遠(yuǎn)端靶器官，并在那里克隆增殖形成轉(zhuǎn)移性腫瘤。然而，病理學(xué)家指出臨床上并沒有觀察到腫瘤細(xì)胞從原發(fā)腫瘤脫落擴散至遠(yuǎn)端組織器官所形成腫瘤轉(zhuǎn)移的直接完整的

2、病理學(xué)證據(jù)，說明腫瘤轉(zhuǎn)移理論還需要完善。腫瘤細(xì)胞形成的理論提出，癌細(xì)胞形成是由于某些干細(xì)胞受到激活，經(jīng)過腫瘤起始干細(xì)胞，腫瘤干細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞的不同階段轉(zhuǎn)變形成的。這些理論啟發(fā)我們提出一種新的假設(shè)，即：原發(fā)腫瘤細(xì)胞可以合成和分泌某些細(xì)胞因子，進(jìn)入到血管或淋巴管，并通過循環(huán)到達(dá)另外一個器官（比如，骨髓，肺），并誘導(dǎo)這些器官內(nèi)的干細(xì)胞發(fā)生癌變，形成繼發(fā)癌組織。
　　本研究通過提取小鼠黑色素瘤細(xì)胞（B16）的細(xì)胞胞質(zhì)成分（melanoma

3、 cell cytoplasm，MCC），對干細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)和體外誘導(dǎo)實驗，來證明某些腫瘤分泌的因子或分子是否也能誘導(dǎo)遠(yuǎn)端器官（肺）形成繼發(fā)性腫瘤病灶。實驗分為三個部分：提取小鼠黑色素瘤細(xì)胞（B16）細(xì)胞蛋白即MCC作為誘導(dǎo)液；體外實驗：提取c-57小鼠的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow stromal cells，BMSCs）作為被誘導(dǎo)的細(xì)胞，MCC誘導(dǎo)液按一定劑量進(jìn)行梯度誘導(dǎo)，加乳酸林格氏液作為空白對照組。體外誘導(dǎo)結(jié)果顯示，被誘

4、導(dǎo)后的干細(xì)胞增殖能力變活躍，細(xì)胞核仁明顯增多。被誘導(dǎo)的干細(xì)胞免疫組織化學(xué)顯示：腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物CD44和NS（Nucleostemin），細(xì)胞增殖抗原PCNA，均明顯陽性，腫瘤標(biāo)記物lin28a弱陽性表達(dá)，說明被誘導(dǎo)的干細(xì)胞具有一定腫瘤干細(xì)胞的特性；體內(nèi)實驗：以BALB/C-nude裸鼠作為誘導(dǎo)對象，裸鼠雙側(cè)腹股溝處給予一定劑量的MCC誘導(dǎo)液，隔天誘導(dǎo)一次，乳酸林格氏液作為空白對照組。體內(nèi)誘導(dǎo)結(jié)果顯示，實驗組裸鼠肺部組織有明顯的實變區(qū)域

5、，而空白對照組裸鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常，沒有實變區(qū)域。免疫組織化學(xué)顯示：CD44，Nucleostemin（NS），lin28a，PCNA在實變區(qū)域明顯呈陽性。對照組裸鼠肺組織顯示：CD44，lin28a呈陰性。這表明誘導(dǎo)液可誘導(dǎo)肺內(nèi)干細(xì)胞向腫瘤干細(xì)胞方向分化。本實驗研究結(jié)果初步表明：在體外實驗中，MCC可促進(jìn)BMSCs增殖，并發(fā)生瘤樣轉(zhuǎn)變。而在體內(nèi)實驗中，某些腫瘤細(xì)胞分泌的某些分子或因子可能通過血液或淋巴道轉(zhuǎn)移至遠(yuǎn)端器官，促進(jìn)其內(nèi)（干）細(xì)胞