大豆蛋白交聯(lián)與豆蛋白紡織的初步研究.pdf

1、大豆纖維是以除去油脂的大豆豆粕作為原料,提取其中的大豆蛋白經(jīng)過與聚乙烯醇混合紡織制成的一種新型纖維。這種纖維具有良好的外觀,手感,舒適性以及保健性。但因為該纖維是由高比例的聚乙烯醇和少量的大豆蛋白混合后經(jīng)縮醛化得來的,所以它并不是完全意義的綠色環(huán)保纖維。一般來講,真正意義上的大豆蛋白纖維應(yīng)為純大豆蛋白或者以大豆蛋白為主料,添加少量添加劑紡織得來的纖維。所以本研究計劃通過使用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶對大豆蛋白進(jìn)行交聯(lián),得到大分子的交聯(lián)大豆蛋白,對交聯(lián)

2、大豆蛋白性質(zhì)分析研究,希望可以進(jìn)而實現(xiàn)大豆蛋白的純紡,做到真正的綠色環(huán)保。這樣既環(huán)保易降解,又可以提高豆餅粉的市場價值。
　　本研究中,利用PCR技術(shù)得到轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶基因,對目的片段酶切后,與表達(dá)載體連接,構(gòu)建一株工程菌株,使其在大腸桿菌中表達(dá)獲得微生物轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的原酶。為了提高表達(dá)量,我們對構(gòu)建好的菌株進(jìn)行精氨酸突變,獲得Arg1＃和5＃突變體,對兩株突變菌株進(jìn)行試表達(dá),發(fā)現(xiàn)Arg1＃突變菌株表達(dá)量沒有升高,而突變體Arg5＃

3、的目的蛋白表達(dá)量升高。培養(yǎng)基優(yōu)化后,發(fā)現(xiàn)突變體表達(dá)量高于LB培養(yǎng)基。菌體表達(dá)獲得目的蛋白以后,將其放置進(jìn)行切割,完成后得到粗酶,酶活可達(dá)到4.5U/ml。將粗酶液通過柱層析純化,得到純化的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶,純度達(dá)90％以上。
　　選擇兩種豆粕進(jìn)行提取蛋白實驗:一種為高溫榨油后的豆粕,另一種為低溫榨油后的豆粕。結(jié)果表明,低溫榨油后的豆粕蛋白提取率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于高溫榨油后的豆粕。對大豆蛋白的提取我們采用了兩種方法:酸堿抽提法和緩沖液直接抽提法,

4、通過比較發(fā)現(xiàn),酸堿抽提法的蛋白提取率一般是直接抽提法的2-3倍。選定后續(xù)實驗蛋白提取方法為酸堿抽提法,隨后對該方法的實驗條件進(jìn)行優(yōu)化,選取四個影響因素:堿溶pH值、料液比、加熱溫度、加熱時間,通過單因素實驗以及正交試驗分析后得出,蛋白提取的最適條件為pH9.0,料液比1:12,加熱溫度60℃,加熱時間1.5h,此時蛋白提取率最高。
　　大豆蛋白交聯(lián)的SDS-PAGE分析表明,大豆蛋白的11S球蛋白酸性亞基可以全部被交聯(lián),堿性亞基幾