2-氯丙酸脫鹵酶的分離純化.pdf

1、2-氯丙酸(2-CPA)是合成農藥、染料、農林和醫(yī)藥化學品等的重要原料，但是，由于2-氯丙酸具有光學活性，一般只有用(S)-構型2-氯丙酸合成的農藥、醫(yī)藥等才具有很高的生理活性或藥理作用，用(R)-構型合成的農藥活性很低或無活性，且可能以競爭性抑制劑的形式起作用。而(R)-構型的2-氯丙酸在其它某些手性醫(yī)藥及其中間體的合成方面有很重要的應用，如可用于合成抗結核病藥物硫乳霉素(thiolactomycin)。 2-氯丙酸脫鹵酶有3

2、種，分別為(S)-2-鹵酸脫鹵酶(EC3.8.1.2)、(R)-2-鹵酸脫鹵酶(EC3.8.1.9)、(R，S)-2-鹵酸脫鹵酶(EC3.8.1.10及EC3.8.1.11)。利用脫鹵酶可選擇性地高效拆分2-氯丙酸。 本文的研究目的是篩選對2-氯丙酸具有脫氯能力的菌株，并建立脫鹵酶的分離純化方法，從而為利用脫鹵酶生產(S)-及(R)-構型光學活性2-氯丙酸奠定基礎。 本文首先從杭州、溫州、富陽等農藥廠附近所采集的11個土

3、樣出發(fā)，篩選出了21支對2-氯丙酸具有脫鹵活性的菌株。其中H9脫鹵能力較強，S4和W20脫鹵酶分別對(S)-2-CPA和(R)-2-CPA具有一定的選擇性脫鹵能力。 由于(R)構型脫鹵酶的應用更為廣泛，因此本文重點針對W20脫鹵酶進行了分離純化研究，經過鹽析、脫鹽、離子交換層析、凝膠層析后獲得了電泳純的脫鹵酶，SDS-PAGE測定酶的分子量為35KDa。對部分酶學性質作了考察后發(fā)現，W20酶的最適反應pH值為10，最適反應溫度為