Cyclin D3與hATF5之間相互作用及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能的研究.pdf

1、Cyclin D3蛋白是D型細胞周期蛋白中的一員。近來的研究證實D型細胞周期蛋白能通過兩種不同的機制發(fā)揮作用。為了尋找能和Cyclin D3相互作用的轉(zhuǎn)錄因子，進一步探索Cyclin D3的轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能，本文以Cyclin D3為誘餌蛋白，利用酵母雙雜交系統(tǒng)成功的在人胎肝cDNA文庫中篩選出Cyclin D3的靶轉(zhuǎn)錄因子—hATF5。用酵母共轉(zhuǎn)化實驗、GST-Pulldown實驗和免疫共沉淀實驗進一步證實了CyclinD3和hATF5不

2、管在體內(nèi)還是體外均能相互作用。而且這種相互作用是特異性的，不管是Cyclin D1、Cyclin D2與hATF5之間，還是Cyclin D3與ATF1、ATF3、ATF4之間均沒有相互作用。通過構(gòu)建突變體，發(fā)現(xiàn)Cyclin D3的C端結(jié)構(gòu)域和hATF5的bZip結(jié)構(gòu)域?qū)τ贑yclin D3和hATF5之間的相互作用是必需的。通過激光共聚焦實驗我們發(fā)現(xiàn)Cyclin D3和hATF5能共定位于細胞核內(nèi)，而且Cyclin D3和hATF5在

3、HeLa細胞中的共轉(zhuǎn)染能促進Cyclin D3和hATF5轉(zhuǎn)移至細胞核內(nèi)以利于hATF5在細胞核內(nèi)發(fā)揮作用。通過在COS1細胞中的雙熒光素酶報告基因測定實驗，發(fā)現(xiàn)Cyclin D3能增強轉(zhuǎn)錄因子hATF5的轉(zhuǎn)錄活性。而Cyclin D1和Cyclin D2則對hATF5的轉(zhuǎn)錄活性并沒有影響。進一步的實驗發(fā)現(xiàn)，Cyclin D3在調(diào)控細胞周期中的靶蛋白CDK4能抑制Cyclin D3對hATF5轉(zhuǎn)錄活性的這種增強作用。 在本文的