探索曲妥珠單抗對(duì)cyclin D3的調(diào)控及其在乳腺癌細(xì)胞中的耐藥機(jī)制.pdf

1、背景:
　　乳腺癌是目前女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，其中20％-30％患者伴有HER2基因的異常擴(kuò)增。曲妥珠單抗的問(wèn)世顯著改善了HER2過(guò)表達(dá)的患者的生存期。然而其使用過(guò)程中耐藥的發(fā)生也是目前治療中面臨的重大難題。研究其耐藥機(jī)制及克服耐藥的方式具有重要的科學(xué)價(jià)值。
　　目的:
　　通過(guò)構(gòu)建曲妥珠單抗耐藥細(xì)胞模型，探索曲妥珠單抗的作用機(jī)制及可能的耐藥機(jī)制。檢測(cè)曲妥珠單抗處理后引起細(xì)胞周期改變的蛋白分子，闡明曲妥珠單抗對(duì)其調(diào)

2、控的方式，明確該分子在曲妥珠單抗靶向治療中的作用及與耐藥產(chǎn)生的關(guān)系。尋找敏感和耐藥細(xì)胞中信號(hào)通路的差異，探索治療曲妥珠單抗耐藥的新策略。
　　方法:
　　首先我們構(gòu)建曲妥珠單抗耐藥的HER2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞模型，通過(guò)MTS、凋亡實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其對(duì)曲妥珠單抗敏感性的改變。通過(guò)western blot方法尋找曲妥珠單抗處理后周期蛋白的變化，通過(guò)RT-qPCR及蛋白降解相關(guān)抑制劑尋找周蛋白變化的原因。利用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析c

3、yclin D3 mRNA水平與預(yù)后的關(guān)系。最后我們通過(guò)敏感和耐藥細(xì)胞中信號(hào)通路的差異進(jìn)行分析，利用MTS及克隆形成實(shí)驗(yàn)尋找曲妥珠單抗耐受后治療的新策略。
　　結(jié)果:
　　通過(guò)細(xì)胞周期檢測(cè)發(fā)現(xiàn)曲妥珠單抗可以在敏感細(xì)胞中通過(guò)下調(diào)cyclin D3蛋白表達(dá)而誘導(dǎo)G1期阻滯，而曲妥珠單抗不能下調(diào)耐藥細(xì)胞中的cyclin D3蛋白表達(dá)。敏感和耐藥細(xì)胞中cyclin D3 mRNA表達(dá)在未發(fā)生顯著改變，且曲妥珠單抗處理后敏感細(xì)胞cyc

4、lin D3 mRNA不會(huì)發(fā)生改變，通過(guò)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)cyclin D3 mRNA水平與HER2陽(yáng)性乳腺癌患者預(yù)后相關(guān)性不明顯。曲妥珠單抗通過(guò)泛素-蛋白酶體途徑中的SCF復(fù)合體促進(jìn)cyclin D3蛋白發(fā)生泛素化降解。cyclin D3蛋白可以和CUL1蛋白結(jié)合，CUL1的缺失可以拮抗曲妥珠單抗對(duì)cyclin D3蛋白引起的降解。MEK抑制劑、PKCδ抑制劑、GLS抑制劑、CDK4/CDK6抑制劑在曲妥珠單抗耐受細(xì)胞中更為敏感。曲妥

5、珠單抗耐藥細(xì)胞中可能存在ERK信號(hào)通路的異常。MEK抑制劑和CDK4/CDK6抑制劑也能很好的抑制曲妥珠單抗耐藥細(xì)胞的增殖。MEK抑制劑可能通過(guò)mTOR信號(hào)通路調(diào)控cyclin D3的降解。
　　結(jié)論:
　　曲妥珠單抗通過(guò)泛素-蛋白酶體系統(tǒng)下調(diào)cyclin D3蛋白的表達(dá)而誘導(dǎo)G1期阻滯，而在耐藥細(xì)胞中不會(huì)下調(diào)cyclin D3蛋白的表達(dá)。MEK抑制劑、PKCδ抑制劑、GLS抑制劑、CDK4/CDK6抑制劑可能作為曲妥珠單抗

6、耐藥治療的新藥物。
　　創(chuàng)新點(diǎn):
　　1.闡明曲妥珠單抗通過(guò)泛素蛋白酶體途徑中SCF復(fù)合體促進(jìn)cyclin D3蛋白降解進(jìn)而引起細(xì)胞G1期阻滯。
　　2.發(fā)現(xiàn)曲妥珠單抗耐受細(xì)胞中cyclin D3蛋白不受曲妥珠單抗調(diào)控。
　　3.Cyclin D3是一個(gè)潛在作為曲妥珠單抗治療有效的蛋白標(biāo)記物。
　　4.發(fā)現(xiàn)MEK抑制劑、PKCδ抑制劑、GLS抑制劑、CDK4/CDK6抑制劑在曲妥珠單抗耐受細(xì)胞中更為敏感。可