8-PN對骨吸收功能影響的體外研究.pdf

1、目的：
　　 8-Prenylnaringenin(8-PN)是迄今發(fā)現(xiàn)的活性最強的植物雌激素，其改善實驗性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的作用已有報道，但其具體機制是否通過影響骨形成或骨吸收未完全闡明。本研究擬觀察：
　　 1、8-PN對小鼠單核巨噬細(xì)胞(RAW264.7)誘導(dǎo)成破骨細(xì)胞的分化及骨吸收功能的影響，并與金雀異黃素、大豆苷元等其他植物雌激素進行比較；
　　 2、8-PN對小鼠成骨細(xì)胞株(MC3T3-E1)分泌的破骨

2、細(xì)胞分化因子NF-κB受體的配體(RANKL)、骨保護素(OPG)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)的影響，并與金雀異黃素、大豆苷元等其他植物雌激素進行比較。
　　 方法：
　　 1、將不同濃度的8-PN(10-8，10-7，10-6M)、金雀異黃素(10-6M)、大豆苷元(10-6 M)作用于RAW264.7，加入M-CSF和RANKL誘導(dǎo)為破骨細(xì)胞，在第3d，6d，9d，12d分別計數(shù)破骨細(xì)胞數(shù)量；
　　

3、2、將上述相應(yīng)濃度的藥物在RAW264.7誘導(dǎo)分化第9d分別加入，第15d檢測培養(yǎng)體系中牛股骨片骨吸收陷窩面積，以反映骨吸收功能；
　　 3、將上述相應(yīng)濃度的藥物在MC3T3-E1培養(yǎng)第9d加入，于第12d提取標(biāo)本，RT-PCR檢測細(xì)胞中RANKL、OPG、M-CSF的mRAN表達變化，ELISA檢測上清液中RANKL、OPG的蛋白濃度。
　　 結(jié)果：
　　 1、8-PN可減少破骨細(xì)胞數(shù)量，劑量依賴性減少骨吸收陷

4、窩面積，其抑制破骨細(xì)胞分化和骨吸收作用弱于雌二醇，但在骨吸收作用上強于另外兩種植物雌激素。
　　 2、8-PN可劑量依賴性抑制成骨細(xì)胞表達和分泌RANKL，對OPG的表達和分泌有一定促進作用，降低RANKL/OPG比值，對M-CSF的表達則無顯著影響。其對RANKL/OPG的調(diào)節(jié)效應(yīng)弱于雌二醇，但強于另外兩種植物雌激素。
　　 結(jié)論：
　　 8-PN能直接抑制破骨細(xì)胞分化和骨吸收，也可通過調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞表達和分泌R