護骨素對人骨巨細胞瘤體外單核基質(zhì)細胞培養(yǎng)影響的研究.pdf

1、本文研究目的：利用細胞培養(yǎng)技術(shù)原代培養(yǎng)骨巨細胞瘤單核基質(zhì)細胞(Stromal-like tumorcells，Stc)并進行細胞鑒定，研究護骨素(Osteoprotegerin，OPG)對體外骨巨細胞瘤(Giant cell tumors，GCT)的抑制增殖、誘發(fā)凋亡的作用，為GCT新的輔助治療方案的確立提供初步的實驗依據(jù)。 研究方法：用膠原酶-Ⅱ消化法體外分離培養(yǎng)8例新鮮GCT標本進行分離培養(yǎng)獲得原代Stc并進行傳代：四種傳統(tǒng)

2、方法測定細胞的基本性質(zhì)；噻唑藍比色法(MTT)測OPG對Stc的細胞毒性作用：流式細胞儀(flow cytometer，F(xiàn)CM)檢測Stc細胞刷期比例的改變以及凋亡率的變化情況；電鏡觀察實驗組細胞核超微結(jié)構(gòu)變化；DNA-Ladder測定OPG對GCT單核基質(zhì)細胞DNA影響。 研究結(jié)果：用膠原酶-Ⅱ消化的方法可以獲得較高純度的Stc，細胞的基本性質(zhì)測定符合GCT主細胞性質(zhì)：MTT法結(jié)果示：OPG濃度在100μmol/L范圍內(nèi)，隨著

3、OPG劑量的增加(0.1、0.01、1、10、100 μmol/L)，細胞的吸光度減小，OPG濃度為10μmol/L時，不同作用時間(12、24、48、72h)，細胞的吸光度不同，48h組最小，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；流式細胞儀結(jié)果示：OPG以不同濃度(1、10、100μmol/L)分別作用48h后，細胞凋亡率及增殖指數(shù)(proliferation index，PI)分別與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)：電鏡觀察到