孕酮對于小鼠胚胎干細(xì)胞增殖作用影響的研究ES分化過程中mvh剪接體的研究.pdf

1、1.孕酮對小鼠胚胎干細(xì)胞增殖作用影響的研究
　　2.ES分化過程中mvh剪切體的研究
　　 第一部分:胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells,ES)具有自我更新和多項(xiàng)分化的潛能。研究表明雌激素促進(jìn)小鼠胚胎干細(xì)胞的增值。為了探討孕酮對小鼠胚胎干細(xì)胞(mES)的影響,分別采用細(xì)胞增殖試驗(yàn)(MTT法),克隆形成試驗(yàn)檢測了孕酮對于胚胎干細(xì)胞的影響,結(jié)果顯示孕酮有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用和促進(jìn)單個(gè)胚胎干細(xì)胞存活的能力。細(xì)胞

2、周期檢測進(jìn)一步證實(shí)加入孕酮后,和對照組相比,胚胎干細(xì)胞處在分裂期的細(xì)胞比例增多,處在S期和G2+M期的細(xì)胞比例增多。說明孕酮促進(jìn)了ES細(xì)胞的DNA合成,細(xì)胞分裂速度加快,為了檢測加入孕酮后對胚胎干細(xì)胞多能性的影響,Western blot結(jié)果顯示加入孕酮后胚胎干細(xì)胞的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Oct-4的表達(dá)變化不大,說明細(xì)胞仍然處在干細(xì)胞的未分化狀態(tài)。細(xì)胞增殖和調(diào)控細(xì)胞周期的因子有關(guān),Real-time PCR檢測了和細(xì)胞周期有關(guān)cyclin,CD

3、K以及一些原癌基因c-myc,c-jun,c-fos.發(fā)現(xiàn)部分表達(dá)上調(diào),孕酮促生長的作用可能和這些因子的表達(dá)水平升高有關(guān)。結(jié)論:孕酮有促進(jìn)ES細(xì)胞增殖和存活的作用。
　　 第二部分:在EB分化過程中,生殖細(xì)胞特異的基因mvh(mouse vasa homologue)會(huì)表達(dá)。Mvh調(diào)節(jié)靶mRNA的翻譯,這些mRNA編碼一些生殖細(xì)胞特異的蛋白。Mvh在細(xì)胞RNA代謝中具有重要作用,參與RNA代謝的幾乎所有過程,包括轉(zhuǎn)錄調(diào)控、mRN