骨鈣素化學(xué)發(fā)光免疫分析法的建立及初步臨床應(yīng)用.pdf

1、目的：本研究旨在建立穩(wěn)定、敏感、特異的檢測(cè)骨鈣素的化學(xué)發(fā)光免疫分析法，為臨床準(zhǔn)確診斷疾病及預(yù)測(cè)疾病的預(yù)后、并進(jìn)而采取相應(yīng)的措施阻止或延緩疾病的發(fā)展進(jìn)程提供客觀的臨床診斷依據(jù)；并對(duì)幾種骨代謝疾病進(jìn)行血清骨鈣素水平的初步觀察，探討化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)骨鈣素濃度變化在骨代謝疾病中的臨床意義。
　　 方法：本研究在方法學(xué)建立階段主要從工藝配方和反應(yīng)體系的優(yōu)化與確定、方法學(xué)性能指標(biāo)的分析、以及穩(wěn)定性觀察等方面進(jìn)行了著手研究；而后在臨床的

2、初步應(yīng)用中則注重對(duì)幾種骨代謝疾病進(jìn)行血清骨鈣素水平的初步觀察，探討化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)骨鈣素濃度變化在骨代謝疾病中的臨床意義。
　　 結(jié)果：
　　 1工藝配方研究
　　 本研究利用雙抗體夾心法檢測(cè)骨鈣素原理，通過對(duì)固相包被工藝配方、封閉工藝配方進(jìn)行探索和優(yōu)化試驗(yàn)研究，最后選用0.05M pH9.5-9.7的碳酸鹽緩沖液作為固相包被用緩沖液，2-8℃孵育20-22小時(shí)；洗板一次，去除結(jié)合不牢固的游離組份；再加惰性

3、蛋白緩沖液于2-8℃孵育18-20小時(shí)以封閉非特異性空余位點(diǎn)，之后去除封閉液；在相對(duì)濕度30％以下的環(huán)境中干燥3-7個(gè)小時(shí)，用鋁箔袋密封包裝，于2～8℃條件保存。
　　 2反應(yīng)體系的研究
　　 本研究還參照同類產(chǎn)品的反應(yīng)模式對(duì)新建立骨鈣素化學(xué)發(fā)光免疫分析法的反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)研究，最后確定反應(yīng)模式為：加入50μl校準(zhǔn)品、質(zhì)控品及待測(cè)樣品到反應(yīng)孔中，再加100μl測(cè)骨鈣素酶結(jié)合物，混勻后置室溫反應(yīng)60分鐘；用洗液沈板4次

4、后，再用蒸餾水洗板一次，拍干；每孔加100μl等量混合的化學(xué)發(fā)光底物A液、B液(各50μl)，在5-20分鐘內(nèi)用化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)發(fā)光值(0.1秒/每孔)，判讀結(jié)果。
　　 3分析性能研究
　　 在工藝配方和反應(yīng)體系研究完成之后，本研究又針對(duì)骨鈣素化學(xué)發(fā)光免疫分析法的分析性能進(jìn)行評(píng)估研究，包括靈敏度分析、特異性分析、劑量反應(yīng)曲線的線性、測(cè)定準(zhǔn)確性、精密度等指標(biāo)。通過對(duì)不同時(shí)間研制的不同批次的骨鈣素化學(xué)發(fā)光免疫分析法成

5、品的性能評(píng)估結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析進(jìn)而制定成品標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)設(shè)置，以有效地控制該方法的持續(xù)穩(wěn)定。最終設(shè)定分析靈敏度即最低檢出限不高于0.20ng/ml；特異性分析：與降鈣素、甲狀旁腺激素、胰島素的交叉反應(yīng)率應(yīng)均小于0.01％；劑量-反應(yīng)曲線的線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不低于0.9900；測(cè)定準(zhǔn)確性：質(zhì)控品的實(shí)測(cè)值與標(biāo)示值的比值應(yīng)在0.90-1.10之間；批內(nèi)不精密度也即分析內(nèi)不精密度以變異系數(shù)(CV％)表示應(yīng)不高于10.0％，批間不精密度也即分析間不精密度

6、以變異系數(shù)(CV％)表示應(yīng)不高于15.0％。
　　 4初步臨床應(yīng)用
　　 本研究還利用該方法制備的骨鈣素化學(xué)發(fā)光法試劑盒在我院進(jìn)行初步的臨床應(yīng)用，觀察不同病種，不同年齡組中血清骨鈣素水平的差異。
　　 結(jié)論：
　　 綜合整個(gè)研制過程及初步臨床應(yīng)用結(jié)果，本研究研制的骨鈣素化學(xué)發(fā)光免疫分析法試劑盒用于骨鈣素的檢測(cè)，其靈敏度、準(zhǔn)確性、線性、精密度、特異性、穩(wěn)定性、臨床靈敏度和臨床特異性等指標(biāo)均能滿足臨床需求，成