雙指標(biāo)化學(xué)發(fā)光免疫分析法早期診斷腦部疾病.pdf

1、隨著人類基因組測(cè)序的完成,惡性疾病研究的重點(diǎn)從基因組學(xué)轉(zhuǎn)移到蛋白質(zhì)組學(xué)研究中。蛋白質(zhì)多組分同時(shí)檢測(cè)已成為當(dāng)前生物分析檢測(cè)的熱點(diǎn),在臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。與傳統(tǒng)平行單一組分分析相比,多組分同時(shí)測(cè)定具有樣品通量高,分析效率高,樣本需求少,檢測(cè)成本低等優(yōu)點(diǎn)。生物標(biāo)志物一般定義為疾病發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中表達(dá)量發(fā)生變化的生物分子,可反映疾病發(fā)展的程度、治療效果和預(yù)測(cè)重復(fù)發(fā)病率。理想的標(biāo)志物檢測(cè)技術(shù)可以在復(fù)雜生物樣品中同時(shí)實(shí)現(xiàn)多個(gè)組分

2、的高靈敏度檢測(cè)。
　　化學(xué)發(fā)光免疫分析法作為一種廣泛發(fā)展的分析技術(shù),兼有免疫反應(yīng)的特異性和化學(xué)發(fā)光分析的高靈敏度。本文利用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酯酶(ALP)催化發(fā)光方法,發(fā)展了兩種不同模式的雙指標(biāo)同時(shí)檢測(cè)的化學(xué)發(fā)光免疫分析新技術(shù),應(yīng)用于腦部疾病(腦膠質(zhì)瘤和腦卒中)血清標(biāo)志物分析。論文分為以下三個(gè)部分:
　　(1)綜述目前多組分檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)展,包括基于標(biāo)記物識(shí)別模式的多組分檢測(cè)和基于空間位置識(shí)別模式的多組分檢測(cè),

3、后者包括芯片技術(shù)和編碼微球技術(shù)等。
　　(2)以聚苯乙烯微孔板為載體,HRP和ALP雙標(biāo)記,構(gòu)建腦膠質(zhì)瘤特異性抗原NSE和CA15-3雙指標(biāo)化學(xué)發(fā)光免疫分析法。檢測(cè)NSE和CA15-3的線性范圍分別為O.2～10ng/mL,(R2＞0.99)和0.2～1OU/mL(R2＞0.99),最低檢測(cè)限分別為0.2ng/mL和0.2U/mL。制備高、中、低濃度的三個(gè)模擬血清樣本,回收率良好,兩種蛋白檢測(cè)無(wú)交叉干擾,有望為腦膠質(zhì)瘤的臨床早期診

4、斷提供堅(jiān)實(shí)的支持。
　　(3)以磁性微球?yàn)檩d體,構(gòu)建了一種磁分離雙組分化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù),測(cè)定腦卒中特異性抗原S100β和NSE,均相免疫反應(yīng),磁性微球快速分離,雙組分之間不存在交叉反應(yīng),對(duì)S100β和NSE的檢測(cè)線性范圍分別為0.02～1ng/mL(R2＞0.99)和1～20ng/mL(R2＞0.99),最低檢測(cè)限分別為0.005ng/mL和0.2ng/mL。實(shí)驗(yàn)考察了血清對(duì)抗原檢測(cè)靈敏度的影響,結(jié)果表明:此法回收率和重現(xiàn)性良