2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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1、該論文闡述了木霉甘露聚糖酶Man1的克隆及其在畢赤酵母表達體系中的表達.首先用PCR擴增了Man1的全長基因,經(jīng)過酶切論證后,交其插入pPIC9K質粒中,構建表達載體.然后轉化大腸桿菌DH5α.通過菌落PCR驗證正向插入子,然后富集培養(yǎng),抽取質粒.表達質粒用SacI線形后,電轉化畢赤酵母GS115得到重組菌.Congo Red平板篩選到12株有正常酶活性的表達,在特異底物的平板上有清晰的水解圈,對照GS115則不產生水解圈.通過提取重組

2、菌的總DNA作為模板,以設計的克隆引物進行PCR擴增得到陽性結果,用出發(fā)菌株Trichoderma reesei總DNA作為模板得到的克隆片段大小和重組菌結果一致,而以GS115總DNA作為模板在同樣條件下結果為陰性,從而確證基因的導入.SDS-PAGE凝膠電泳顯示出該蛋白質的大小在45kDa左右.將其cDNA克隆連接到載體中表達,其活性和全長基因克隆的一致,說明酵母細胞能夠正常剪切該基因內部的兩個內含子,表達有正?；钚缘拿阜肿?基因工

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