白介素17對(duì)慢性心衰大鼠心肌STAT3水平的影響.pdf

1、研究目的:
　　 隨著心力衰竭(HF)逐漸成為威脅當(dāng)代中老年人健康的重要疾病之一,心衰的發(fā)病發(fā)展機(jī)制也被廣泛地研究和探索。近年來(lái),心肌重塑作為慢性心力衰竭發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制也日益受到人們的關(guān)注。其中,長(zhǎng)期的心肌肥大被認(rèn)為是心衰發(fā)生的重要因素之一。新近研究顯示,長(zhǎng)時(shí)間的腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)過(guò)度激活參與了肥大心肌轉(zhuǎn)向衰竭的發(fā)生機(jī)制,其部分過(guò)程很可能與JAK-STAT信號(hào)途徑有關(guān)。
　　 JAK-STAT信號(hào)途徑是前

2、炎性細(xì)胞因子白介素17(IL-17)的作用途徑之一。有實(shí)驗(yàn)表明,心衰發(fā)生后抑制JAK-STAT信號(hào)途徑可以抑制心肌肥大,減輕心肌損害。但該途徑中,不同的因子在激活后具有相反的作用。其中,STAT3主要發(fā)揮抑制心肌細(xì)胞凋亡的作用。相反的,STAT1則相對(duì)具有促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡作用。而兩者激活時(shí)間略有不同,STAT3較STAT1更早激活。因此,本實(shí)驗(yàn)擬在建立心衰模型的同時(shí)予以抗體干預(yù),以進(jìn)一步驗(yàn)證STAT3的心肌保護(hù)作用,并探索早期應(yīng)用白介素

3、17抗體能否通過(guò)干擾JAK-STAT途徑影響STAT3的水平,從而抑制其在心衰早期的心肌內(nèi)源性保護(hù)作用。
　　 研究方法:
　　 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康雄性Wistar大鼠20只,體重(250±20)g,給予常規(guī)飼養(yǎng)。隨機(jī)分組:A:抗IL-17心衰組(n=5);B:IgG心衰組(n=5);C:心衰對(duì)照組(n=5);D:空白對(duì)照組(n=5)。
　　 阿霉素(ADR)誘導(dǎo)心衰:A、B、C三組:腹腔注射ADR,用生理鹽水將AD

4、R配制成2mg/ml溶液,給藥8次。予以第2、4天ADR1mg/kg.ip,第6、8天ADR2mg/kg.ip,第10、12天ADR3mg/kg.ip,第14、16天ADR4mg/kg.ip,累計(jì)ADR總量20mg/kg;D組:注射相同體積的生理鹽水。
　　 同時(shí)予以干預(yù)措施:A組:抗大鼠IL-17抗體腹腔注射(100μg/0.8mlPBS);B組:同型IgGl腹腔注射(100μg/0.8mlPBS);C、D兩組:腹腔注射0.8

5、mlPBS。以上操作分8次進(jìn)行,于每次給予阿霉素注射后進(jìn)行(0.1ml/次)。
　　 進(jìn)行行為體征觀察,體重稱量和超聲心動(dòng)圖檢測(cè):室間隔厚度(IVST)、左心室后壁厚度(LVPWT)及射血分?jǐn)?shù)(EF)的測(cè)定,并加以比較。
　　 心功能檢測(cè)完畢后,取出肺組織、肝臟、腎臟和心臟。肺組織、肝臟和腎臟制作HE染色病理切片,觀察形態(tài)學(xué)變化。心臟采用分析天平稱取質(zhì)量,計(jì)算心臟重量指數(shù)(HWI)。部分組織制作HE染色病理切片,觀察心肌

6、損害程度。其他組織采用快速冷凍液態(tài)氮-80℃保存,免疫蛋白印跡法(Westernblot)測(cè)定pSTAT3及t-STAT3表達(dá)水平。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理結(jié)果。
　　 結(jié)果:
　　 行為體征變化:A、B、C三組均明顯出現(xiàn)慢性心衰現(xiàn)象,D組狀態(tài)良好。
　　 體重變化:A、B兩組體重明顯下降(p＜0.05),C組體重相對(duì)有所下降,但無(wú)顯著差異(p＞0.05),D組體重明顯增加(p＜0.05)。A、B、C三組大

7、鼠終末體重明顯小于D組(p＜0.05),A組終末體重明顯小于B、C兩組(p＜0.05),B、C兩組之間無(wú)明顯差異(p＞0.05)。
　　 超聲心動(dòng)圖結(jié)果:IVST:A、B、C三組明顯大于D組(p＜0.05),A、B、C三組之間無(wú)明顯差異(p＞0.05)。LVPWT:A、B、C三組明顯大于D組(p＜0.05),A、B、C三組之間無(wú)明顯差異(p＞0.05)。EF:A、B、C三組明顯小于D組(p＜0.05),A組明顯小于B、C兩組(p

8、＜0.05),B、C兩組之間無(wú)明顯差異(p＞0.05)。
　　 HWhA、B、C三組明顯大于D組(p＜0.05),A、B、C三組之間無(wú)明顯差異(p＞0.05)。
　　 心肌、肺、肝臟及腎臟病理學(xué)變化:心肌:A、B、c三組均出現(xiàn)明顯的心肌損害表現(xiàn),以A組更為嚴(yán)重;肺:A、B、C三組均不同程度地出現(xiàn)肺損傷,以A組更為嚴(yán)重;肝臟:A、B、C三組均不同程度地出現(xiàn)肝臟損害,三組間差異不明顯;腎臟:四組表現(xiàn)均基本正常。D組各臟器表現(xiàn)

9、正常。
　　 p-STAT3:A、B、C三組較D組明顯增加(p＜0.05);A組明顯少于B、C兩組(p＜0.05);B組明顯少于C組(p＜0.05)。
　　 t-STAT3:A、B、C三組較D組明顯增加(p＜0.05);A組明顯少于B、C兩組(p＜0.05);B、C兩組之間無(wú)明顯差異(p＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 應(yīng)用IL-17抗體在心衰早期抑制JAK-STAT途徑,明顯減少了STAT3的激活及表