STAT3信號(hào)通路對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞VEGF、sFlt-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：滋養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)異常可能影響胎盤功能，引發(fā)妊娠相關(guān)疾病。本研究通過檢測(cè)在Poly(I:C)誘導(dǎo)下抑制人絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR8-SVneo細(xì)胞中STAT3通路后VEGF、sFlt-1表達(dá)的變化，了解STAT3通路對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞VEGF、sFlt-1表達(dá)的影響。
　　方法：
　　1 Poly(I:C)刺激HTR8-SVneo細(xì)胞，收集刺激0h、2h、4h、6h、12h、24后的細(xì)胞，RT-PCR檢測(cè)sFlt-1，VEGF mRNA

2、表達(dá)變化；
　　2實(shí)驗(yàn)分為五組：①HTR8-SVneo細(xì)胞；②HTR8-SVneo細(xì)胞+poly(I:C)；③HTR8-SVneo細(xì)胞+siRNA；④HTR8-SVneo細(xì)胞+siRNA STAT3；⑤HTR8-SVneo細(xì)胞+siRNA STAT3+poly(I:C)；
　　3 Western法測(cè)量①③④組STAT3及p-STAT3，了解是否轉(zhuǎn)染成功，且轉(zhuǎn)染本身對(duì)實(shí)驗(yàn)有無影響；測(cè)量①②組的STAT3及p-STAT3，了解P

3、oly(I:C)在滋養(yǎng)細(xì)胞HTR8-SVneo中是否影響了STAT3的表達(dá)；
　　4 RT-PCR法測(cè)量①②④⑤組的sFlt-1，VEGF mRNA表達(dá)變化，了解STAT3在滋養(yǎng)細(xì)胞HTR8-SVneo中對(duì)VEGF及sFlt-1的影響。
　　結(jié)果：
　　1 SFlt-1 mRNA表達(dá)水平在Poly(I:C)（10ug/m1）刺激2h,4h,12h與對(duì)照組相比明顯升高（t1=5.59,P1=0.005;t2=3.75,P

4、2=0.020;t3=2.979,P3=0.041）；VEGF mRNA表達(dá)在刺激2h,4h,12h顯著受到抑制（t1=3.02, P1=0.039;t2=3.004, P2=0.040;t3=2.979,P3=0.410）；從時(shí)效性來說，Poly(I:C)對(duì)sFlt-1、VEGF mRNA表達(dá)均在2h和4h效應(yīng)最明顯。
　　2 HTR8-SVneo細(xì)胞在轉(zhuǎn)染STAT3 siRNA48h后， Western blot檢測(cè)①③④組S

5、TAT3，p-STAT3，結(jié)果表明相對(duì)于①組及③組而言，轉(zhuǎn)染STAT3 siRNA后HTR8-SVneo細(xì)胞中STAT3，p-STAT3蛋白明顯降低，提示轉(zhuǎn)染成功。
　　3 Western blot檢測(cè)①②組STAT3，p-STAT3，結(jié)果表明②組與①組比較，STAT3表達(dá)無明顯變化，但p-STAT3明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　4④組與①組比較，sFlt-1mRNA顯著升高（t=3.66,P=0.021），VEGF mRN

6、A顯著降低（t=3.03,P=0.038），提示STAT3在滋養(yǎng)細(xì)胞HTR8-SVneo中對(duì)VEGF、sFlt-1有影響；
　　5 Poly(I:C)（10ug/ml）誘導(dǎo)后，⑤組表達(dá)sFlt-1mRNA較②組升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.80,P=0.048），VEGFmRNA較②組降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t1=2.79, P=0.049），提示在Poly(I:C)可通過STAT3通路影響VEGF及sFlt-1。
　　結(jié)論：