恩度對(duì)Lewis肺癌成熟和未成熟血管作用差異及超聲造影血流動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià).pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行了論述：
　　第一部分 恩度對(duì)Lewis肺癌中成熟和未成熟血管的作用差異
　　目的：
　　本研究通過建立鼠Lewis肺癌的皮下移植瘤模型、采用不同的血管標(biāo)記識(shí)別腫瘤內(nèi)成熟及未成熟微血管（已有多項(xiàng)研究證實(shí)CD31陽性而CD34陰性代表未成熟血管，而CD31陽性且CD34陽性代表成熟血管），計(jì)算恩度治療后腫瘤內(nèi)成熟及未成熟腫瘤微血管的變化來判斷恩度對(duì)不同成熟度腫瘤新生血管的作用差異，并通過雙光子顯微鏡直

2、觀的觀察恩度治療后Lewis肺癌模型中腫瘤微血管結(jié)構(gòu)形態(tài)的變化。
　　方法：
　　建立40只小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤模型，待移植瘤生長至長徑約6-7mm時(shí)，隨機(jī)分為4組，次日起分別經(jīng)腹腔注射生理鹽水鈉(normal saline，NS)、低劑量恩度(5mg/kg)、中劑量恩度(25mg/kg)或高劑量恩度(50mg/kg)，每天給藥1次，連續(xù)給藥14天。用藥后每天觀察兩組小鼠的一般情況，并每隔一天測定小鼠腫瘤的大小。

3、r>　　藥物治療7天后，實(shí)驗(yàn)小鼠尾靜脈注射熒光素標(biāo)記的葡聚糖(FD2000S)，并于當(dāng)日使用雙光子顯微鏡觀察腫瘤血管形態(tài)改變。
　　藥物治療14天后，處死小鼠，并完整切除腫瘤，免疫組織化學(xué)檢測腫瘤CD31及CD34的表達(dá)情況，并分別計(jì)數(shù)CD31及CD34標(biāo)記的腫瘤血管的微血管密度(MVD)。
　　結(jié)果：
　　1.藥物治療開始后，隔日測定并計(jì)算各組小鼠皮下移植腫瘤的平均體積，獲得各組腫瘤生長曲線，觀察到藥物治療14天后，

4、各劑量恩度治療組體積均明顯小于對(duì)照組，尤其是高劑量恩度治療組更加明顯（低、中、高劑量恩度治療組腫瘤體積分別為3991.51±761.87mm3，2735.06±558.30mm3和1433.86±275.27mm3，而對(duì)照組為4869.80±989.95mm3，P＜0.05）。高劑量恩度治療組的腫瘤體積也明顯小與低、中劑量恩度治療組(P＜0.05)。
　　2.藥物治療7天后，雙光子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)與小鼠正常下肢肌肉血管比較，與對(duì)照組

5、的血管紊亂無章不同，不同劑量恩度治療后Lewis肺癌移植瘤顯微鏡下觀察微血管形態(tài)更加接近于正常下肢肌肉的微血管，也即:恩度治療后導(dǎo)致的腫瘤血管正?；憩F(xiàn);并隨著恩度劑量的提高，微血管的數(shù)目依次減少。
　　3.不同標(biāo)記免疫組化染色發(fā)現(xiàn):CD31免疫組化染色標(biāo)記的血管明顯比CD34免疫組化染色標(biāo)記的血管增多提示CD31標(biāo)記血管與CD34所標(biāo)記血管的顯著不同。
　　4、與對(duì)照組相比，不同劑量恩度治療14天后CD31MVD均明顯減少

6、，尤其是在高劑量恩度治療組(低、中、高劑量恩度治療組CD31MVD分別為61.56±6.53、52.80±5.77和39.22±6.94，與對(duì)照組68.98±7.62相比，P＜0.05)。然而，與對(duì)照組相比，不同劑量恩度治療14天后CD34MVD并未見明顯減少（低、中、高劑量恩度治療組CD34MVD分別為28.02±3.15、26.52±2.54和24.68±4.13與對(duì)照組27.54±2.98相比，P＞0.05）。
　　5、CD

7、31"CD34-或CD31MVD減去CD34MVD代表未成熟的血管，而CD34+代表成熟血管。與對(duì)照組相比，不同劑量恩度治療后，CD31MVD減去CD34 MVD值明顯下降，并且隨著恩度劑量的增加，這種下降更不明顯。（低、中、高劑量恩度治療組CD31MVD-CD34MVD分別為3.54±5.97，26.28±5.33和14.54±3.61與對(duì)照組41.44±6.62相比，P＜0.01）;而CD34無明顯變化，提示不同劑量的恩度主要抑制了

8、未成熟血管，而對(duì)成熟血管無顯著抑制作用。
　　結(jié)論：
　　1、不同劑量的恩度對(duì)Lewis肺癌移植瘤有抑制作用，而且隨著藥物劑量的提高，這種抑制作用逐步增強(qiáng)。
　　2、CD31免疫標(biāo)記及CD34免疫標(biāo)記所標(biāo)記的Lewis肺癌移植瘤中的微血管有很大的不同，可以據(jù)此判斷腫瘤內(nèi)存在的成熟血管及未成熟血管。
　　3、不同劑量恩度治療第7天，有腫瘤血管形態(tài)趨于正常血管的變化趨勢。
　　4、不同劑量的恩度作用14天后，主

9、要表現(xiàn)為腫瘤CD31標(biāo)記的微血管密度的下降，而CD34標(biāo)記的成熟血管的微血管密度變化不明顯，進(jìn)一步分析可得出結(jié)論恩度主要抑制了腫瘤內(nèi)的未成熟血管，而對(duì)成熟血管無明顯抑制作用。
　　第二部分 超聲造影評(píng)價(jià)恩度治療后Lewis肺癌血流動(dòng)力學(xué)動(dòng)態(tài)變化的研究
　　目的:
　　本研究采用Lewis肺癌移植瘤小鼠模型進(jìn)行腹腔內(nèi)注射恩度治療或生理鹽水對(duì)照治療，每隔2天行超聲造影檢查動(dòng)態(tài)觀察兩組腫瘤各血流灌注參數(shù):峰值強(qiáng)度、達(dá)峰時(shí)間及

10、平均通過時(shí)間的變化，觀察恩度治療后腫瘤內(nèi)血流動(dòng)力學(xué)的動(dòng)態(tài)改變特定，并于治療結(jié)束后，行免疫組化CD31的微血管密度計(jì)數(shù)，并將超聲造影參數(shù)與腫瘤的微血管密度進(jìn)行相關(guān)性比較，旨在探討恩度治療后各超聲造影參數(shù)的動(dòng)態(tài)變化來推斷恩度導(dǎo)致的腫瘤微血管結(jié)構(gòu)或功能變化。
　　方法：
　　建立12只小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤模型，待移植瘤生長至長徑約6-7mm時(shí)，隨機(jī)分為2組，次日起分別經(jīng)腹腔注射生理鹽水鈉(normal saline，NS)

11、或恩度(5mg/kg)，每天給藥1次，連續(xù)給藥14天。用藥后每天觀察兩組小鼠的一般情況，并每隔一天測定小鼠腫瘤的大小。
　　藥物治療后，分別于第2、5、8、11、14對(duì)各動(dòng)物模型移植瘤行超聲造影檢查，并應(yīng)用超聲造影定量分析軟件進(jìn)行脫機(jī)分析，獲取峰值強(qiáng)度(PI)、達(dá)峰時(shí)間(TTP)和平均通過時(shí)間(mTT)等血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　藥物治療14天行超聲造影檢查后，處死小鼠，并完整切除腫瘤，免疫組織化學(xué)檢測腫瘤CD31并計(jì)數(shù)微血管密

12、度(MVD)，比較各超聲造影參數(shù)與微血管密度之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1、成功建立移植瘤，動(dòng)態(tài)觀察各組移植瘤大小并記錄，藥物治療結(jié)束時(shí)，對(duì)照組及恩度治療組小鼠移植瘤體積分別為:生理鹽水組:5098.88±498.17mm3，低劑量恩度治療組:4374.21±242.05 mm3，P＜0.05。
　　2、分別在藥物治療治療后2、5、8、11和14天行超聲造影檢查，記錄每次測量相關(guān)血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，隨著治療時(shí)間的延長，

13、恩度組的峰值強(qiáng)度逐漸低于對(duì)照組，于第11天時(shí)與對(duì)照組開始有顯著性差異(25.89±10.27dB vs35.17±12.33 d，P＜0.05);恩度組治療后各時(shí)間點(diǎn)的達(dá)峰時(shí)間均較對(duì)照組略延長，至第8天時(shí)與對(duì)照組相比差異有顯著性(10.54±5.36 vs6.54±4.23 at day8，P＜0.05)，第14天時(shí)達(dá)峰時(shí)間差異不顯著。而恩度組與對(duì)照組相比，其平均通過時(shí)間略有縮短，從第5天即開始有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(59.35±11.22 vs

14、82.25±11.36 at day5，P＜0.05)，至第11天以后又不再有差異。
　　3、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)照組免疫組織化學(xué)檢測的微血管密度為72.93±12.20，恩度治療組的微血管密分別為54.07±10.76。與對(duì)照組相比，恩度治療組的微血管密度顯著減少，恩度治療組與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＜0.05）
　　4、對(duì)超聲造影定量及擬合曲線分析（團(tuán)注法）測定的腫瘤灌注參數(shù)與反映腫瘤血管生成的微血管密度進(jìn)行相關(guān)性分析

15、顯示:峰值強(qiáng)度(PI)與微血管密度呈正相關(guān)(r=0.682，P＜0.05)，而其它參數(shù):達(dá)峰時(shí)間(TTP)、平均通過時(shí)間(mTT)與微血管密度之間無明顯相關(guān)性（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、超聲造影可以用于評(píng)價(jià)恩度治療后Lewis肺癌移植瘤血流動(dòng)力學(xué)動(dòng)態(tài)變化，其指標(biāo)的變化可以從一些方面反映腫瘤微血管結(jié)構(gòu)及功能的變化。
　　2、在恩度治療過程中，不同的超聲造影血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)表現(xiàn)為不同的變化規(guī)律，這些不同的參數(shù)代表