腎炎系膜細(xì)胞中USP2-69的表達(dá)及其意義.pdf

1、泛素-蛋白酶體途徑是調(diào)控細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)代謝的一個重要途徑,它在很多細(xì)胞活動,包括細(xì)胞周期、信號傳導(dǎo)、受體功能、發(fā)育分化中起調(diào)節(jié)作用。該系統(tǒng)是一個受多種因素調(diào)控的可逆過程,這其中存在一些特異性的去泛素化蛋白酶的參與。泛素特異性蛋白酶2(USP2),就是去泛素化酶家族中的重要一員。USP2基因定位于11q23的一個單個基因上,依據(jù)選擇性剪接方式形成三種亞型即USP2-41,USP2-45及USP2-69。USP2各亞型可表達(dá)于多種成年及胚胎性

2、組織中,包括睪丸、心臟、骨骼肌、皮膚、肝臟及腎臟等。近年來研究表明USP2在細(xì)胞內(nèi)具有多功能的特性,除了參與蛋白質(zhì)泛素化的調(diào)節(jié)外,還在調(diào)控細(xì)胞分化及細(xì)胞增生方面發(fā)揮重要作用。例如在睪丸中USP2-69的表達(dá)是精子生長發(fā)育的重要調(diào)節(jié)因子。在前列腺癌中USP2-69可以通過穩(wěn)固抑制凋亡蛋白脂肪酸合酶(FAS),促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長:同時USP2-69還是Mdm2的去泛素化酶,后者為p53的泛素連接酶,USP2-69上調(diào)可間接引起p53的降解,進(jìn)

3、一步引起p53下游靶基因的表達(dá)變化,最終也促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長。已有報道USP2-69亞型在腎臟中高表達(dá),但是其表達(dá)定位及作用尚不清楚。此外,腎小球系膜細(xì)胞(mesangial cell,MsC)增生是多種腎小球腎炎的一個共同的病理特征,而腎組織USP2-69表達(dá)是否可能對腎炎中MsC增生發(fā)揮重要的作用,目前也未見報道。所以關(guān)于在腎小球腎炎中USP2是否表達(dá)及其是否對MsC增生可能發(fā)揮重要的作用是一個值得探索的話題。
　　 為此,

4、本課題通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及人體腎活檢材料實(shí)驗(yàn),研究USP2-69在腎MsC中的表達(dá)及其影響因素。體外實(shí)驗(yàn)中,首先檢測了正常MsC中USP2-69的表達(dá),然后應(yīng)用常見的炎癥相關(guān)因子IL-1β以及抗胸腺細(xì)胞血清ATS(可與MsC表面抗原結(jié)合形成致腎炎免疫復(fù)合物)和含補(bǔ)體的新鮮人血清,對培養(yǎng)的正常大鼠MsC進(jìn)行處理,結(jié)果顯示正常大鼠MsC中存在基礎(chǔ)水平的USP2-45和USP2-69的表達(dá),IL-1β及免疫復(fù)合物均可引起USP2-69亞型mRN

5、A和蛋白水平表達(dá)升高,而USP2-45亞型表達(dá)沒有變化。此外,炎癥因子及免疫復(fù)合物引起USP2-69白上調(diào)的同時伴有細(xì)胞生長調(diào)節(jié)蛋白如PCNA的蛋白表達(dá)升高及p27蛋白表達(dá)降低,提示USP2-69的表達(dá)上調(diào)可能與MsC的增生密切相關(guān)。
　　 為了明確腎小球腎炎中MsC USP2-69的表達(dá),我們對臨床收集的人腎穿刺活檢標(biāo)本包括各種腎小球腎炎及腎癌癌旁正常標(biāo)本共57例進(jìn)行了USP2-69的免疫組化檢測,結(jié)果顯示USP2-69在腎小

6、球毛細(xì)血管襻內(nèi)有表達(dá),且多分布于腎小球系膜區(qū),腎小球內(nèi)USP2-69的表達(dá)水平在不同病理類型的腎小球腎炎中存在較大的差異。與癌旁正常腎組織相比,USP2-69在微小病變和膜性腎炎的腎小球中表達(dá)升高不明顯(P＞0.05);在急性彌漫增生性腎炎、狼瘡性腎炎以及IgA腎病的小球內(nèi)表達(dá)則明顯升高,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。此外USP2-69還廣泛表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞和部分球囊壁層上皮細(xì)胞。
　　 此外,我們對腎穿標(biāo)本連續(xù)切片

7、又進(jìn)行了細(xì)胞增殖核抗原(PCNA)的免疫組化檢測。與癌旁正常組織相比,PCNA陽性細(xì)胞數(shù)在急性彌漫增生性腎炎、狼瘡性腎炎和IgA腎病的小球內(nèi)表達(dá)明顯增多(P＜0.05),而在微小病變和膜性腎炎小球內(nèi)表達(dá)無明顯增多(P＞0.05),此趨勢與USP2-69表達(dá)變化一致。同時在以MsC增生為主的狼瘡性腎炎(Ⅳ型)及IgA腎病(系膜增生型)連續(xù)切片中USP2-69與PCNA在腎小球內(nèi)的分布也具有一致性。這一結(jié)果并結(jié)合細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)USP2-69可

8、表達(dá)于腎小球MsC且與MsC的增生可能具有一定的相關(guān)性。
　　 綜上所述,我們的實(shí)驗(yàn)首次證實(shí)腎小球MsC可表達(dá)USP2-69,炎癥因子及免疫復(fù)合物可誘導(dǎo)MsC USP2-69亞型表達(dá)升高,同時上調(diào)PCNA的蛋白表達(dá),下調(diào)p27的蛋白表達(dá);人腎炎組織MsC中USP2-69的表達(dá)上調(diào)與腎炎病理類型有關(guān),主要在以系膜增生為主的腎小球腎炎中的表達(dá)升高較為顯著,這些結(jié)果提示MsC USP2-69亞型表達(dá)升高與細(xì)胞的增生可能存在一定的聯(lián)系。