HCG對(duì)β1,4-GalTⅠ在調(diào)控胚胎著床作用中的影響及調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、哺乳動(dòng)物胚胎著床包含子宮與胚胎之間一系列的同步協(xié)調(diào)的變化，是游離的胚泡與子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的識(shí)別、定位、黏附，進(jìn)而植入子宮基質(zhì)。成功著床依賴于子宮內(nèi)膜接受狀態(tài)的建立與胚泡侵入性的形成，即著床窗口期。著床窗口期在雌、孕激素的調(diào)解下子宮內(nèi)膜分泌的大量細(xì)胞因子、黏附分子、蛋白水解酶等著床相關(guān)因子，介導(dǎo)胚胎與子宮內(nèi)膜的識(shí)別、黏附，進(jìn)一步調(diào)控胚胎著床的進(jìn)程。
　　 目的:探討人絨毛膜促性腺激素(HCG)作用下，模擬著床期子宮內(nèi)膜細(xì)胞的子宮內(nèi)

2、膜癌細(xì)胞（RL95-2細(xì)胞）中β1，-GalTI表達(dá)水平變化及對(duì)胚胎和子宮內(nèi)膜黏附的影響，并探討與EGFR相關(guān)信號(hào)通路相關(guān)性;調(diào)控RL95-2細(xì)胞β1，4-GalTI的表達(dá)，檢測(cè)相應(yīng)基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs及細(xì)胞外基質(zhì)ECM表達(dá)變化，分析β1，4-GalTI對(duì)胚胎與子宮內(nèi)膜黏附的影響，進(jìn)一步探討β1，4-GalTI調(diào)控胚胎著床的分子機(jī)制。
　　 方法:構(gòu)建體外著床模型，以人胎盤絨毛癌細(xì)胞（JAR細(xì)胞）模擬著床前胚胎，以子宮內(nèi)膜癌細(xì)

3、胞（RL95-2細(xì)胞）模擬著床前子宮內(nèi)膜;改變子宮內(nèi)膜環(huán)境人絨毛膜促性腺激素(HCG)的水平，免疫印跡、RT-PCR技術(shù)檢測(cè)HCG對(duì)β1，4-GalTI表達(dá)的影響;免疫細(xì)胞化學(xué)染色分析HCG作用下β1，4-GalTI半乳糖基化的改變;RCA-1Lectin-blot技術(shù)分析HCG作用下Galβ1，4-GlcNAc糖鏈分支形成情況;檢測(cè)HCG影響EGFR相關(guān)信號(hào)通路蛋白表達(dá)水平;分別通過熒光顯微鏡和流式細(xì)胞技術(shù)分析RL95-2細(xì)胞和JAR

4、細(xì)胞間粘附的情況。
　　 將β1，4-GalT基因調(diào)控質(zhì)粒（過表達(dá)質(zhì)粒、干擾質(zhì)粒）、干擾對(duì)照質(zhì)粒和空質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到RL95-2細(xì)胞中，采用免疫熒光、RT-PCR、免疫印跡技術(shù)、免疫細(xì)胞化學(xué)染色等技術(shù)分別檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中β1，4-GalTI的表達(dá)情況以及對(duì)MMPs、ECM表達(dá)的影響;分別通過熒光顯微鏡和流式細(xì)胞技術(shù)觀察β1，4-GalTI對(duì)體外著床模型RL95-2細(xì)胞與JAR細(xì)胞的粘附影響;RT-PCR技術(shù)檢測(cè)HCG對(duì)β1，4

5、-GalTⅠ及MMPs-TIMP-ECM通路表達(dá)影響。
　　 結(jié)果:(1)子宮內(nèi)膜細(xì)胞中β1，4-GalT-Ⅰ表達(dá)與HCG呈劑量、時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系，HCG最佳作用條件為5×10-4ug/ul、36h（P＜0.01）;(2)HCG作用下明顯上調(diào)EGFR、NF-κB、ICAM-1、EGF表達(dá)(P＜0.01);(3)HCG可促進(jìn)JAR細(xì)胞對(duì)RL95-2細(xì)胞的黏附作用(P＜0.01);(4)子宮內(nèi)膜細(xì)胞轉(zhuǎn)染β1，4-GalT-Ⅰ基因調(diào)控質(zhì)

6、粒后，過表達(dá)組可明顯上調(diào)MMP2、MMP9，并明顯下調(diào)LN、TIMP-1，干擾組可明顯下調(diào)MMP2、MMP9，并明顯上調(diào)LN、TIMP-1(P＜0.01);(5)子宮內(nèi)膜細(xì)胞轉(zhuǎn)染β1，4-GalT-Ⅰ基因調(diào)控質(zhì)粒后，過表達(dá)組可明顯提高JAR細(xì)胞對(duì)RL95-2細(xì)胞的黏附作用，干擾組可使黏附作用下降(P＜0.01);(6)RT-PCR結(jié)果顯示:HCG明顯上調(diào)MMP2、MMP9表達(dá)，下調(diào)LN、TIMP-1表達(dá)（P＜0.01）。