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文檔簡介
1、卵巢癌是婦科三大癌癥之一,致死率一直居高不下。飲用紅茶能降低罹患卵巢癌的風(fēng)險。紅茶是世界上消費量最大的茶類。茶黃素是一類具有多種生理活性的紅茶多酚。近年來,茶黃素的抗癌活性成為了研究熱點。但是,多數(shù)現(xiàn)有研究以茶黃素混合物為實驗材料,對茶黃素抗癌機理的研究并不完全,且有關(guān)茶黃素抑制卵巢癌的作用及機理的報道很少。本研究從四種茶黃素單體中篩選出一種用于評估其抗卵巢癌活性。主要研究內(nèi)容如下:
1、比較了四種茶黃素單體對卵巢癌細胞OVC
2、AR-3和A2780/CP70增殖、誘導(dǎo)HUVEC管腔形成、VEGF分泌、凋亡和Caspase活性的作用。發(fā)現(xiàn)四種茶黃素單體對兩種卵巢癌細胞均有增殖抑制作用,且在相同濃度下,四種茶黃素單體對卵巢癌細胞的毒性大于對正常細胞IOSE364的毒性。四種茶黃素單體都表現(xiàn)出良好的抗血管生成活性,明顯減少癌細胞分泌VEGF。TF2A、TF2B和TF3均能誘導(dǎo)兩種卵巢癌細胞凋亡,提高Caspase-3/7、8、9活性??偟膩砜?,TF2A、TF2B和T
3、F3抗卵巢癌效果比較接近,而TF1與前三者的抗癌效果差異較大、抗卵巢癌廣譜性較差。鑒于本研究所采用的茶黃素單體分離提純方法中TF3得率遠大于TF2A和TF2B,且在一些紅茶中TF3的含量也大于TF2A、TF2B的含量,故選用TF3作為后續(xù)實驗材料。
2、研究發(fā)現(xiàn)TF3可以抑制OVCAR-3細胞誘導(dǎo)的血管生成、雞胚絨毛尿囊膜血管形成,降低OVCAR-3細胞HIF-1α表達和VEGF分泌。Western blot實驗和熒光素酶報告
4、基因?qū)嶒炞C實,TF3可通過Akt/mTOR/p70S6K/4E-BP1通路和Akt/c-Myc通路抑制HIF-1α/VEGF通路。Akt抑制劑wortmannin可以增強OVCAR-3細胞對TF3的敏感性,而過表達Akt會降低OVCAR-3細胞對TF3的敏感性。OVCAR-3細胞還能通過Notch-1/c-Myc通路抑制HIF-1α/VEGF通路。Notch抑制劑DAPT會增強OVCAR-3細胞對TF3的敏感性,而過表達NICD會增強O
5、VCAR-3細胞對TF3的耐受性。在本實驗中,未發(fā)現(xiàn)MAPK通路參與TF3的抗腫瘤血管生成作用。
3、研究發(fā)現(xiàn)TF3可以劑量依賴性增加OVCAR-3細胞凋亡,增強Caspase-3/7、8、9活性。Western blot實驗顯示,TF3非ATM依賴性激活Chk2、上調(diào)Bax表達、下調(diào)Bcl-xL表達、促進PARP-1裂解,但對p53、Bad、Bcl-2、Mcl-1、Apaf-1表達無明顯影響。siRNA轉(zhuǎn)染實驗證實,TF3通
6、過激活Chk2改變促/抗凋亡Bcl-2蛋白比例、活化Caspase-3/7和9、促進PARP-1裂解,引起內(nèi)源性凋亡。此外,TF3還能上調(diào)OVCAR-3細胞中死亡受體Fas和DR5表達,活化Caspase-8,引起外源性凋亡。
4、研究發(fā)現(xiàn)TF3誘導(dǎo)OVCAR-3細胞周期阻滯于G0/G1期,其機理是TF3上調(diào)p27,下調(diào)CyclinD1、CDK4和p-Rb蛋白水平。
總之,本文從抑制增殖、減少腫瘤血管生成、促進凋亡和
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