五沒食子?；咸烟且种坡殉舶┘?xì)胞增殖及其機(jī)制的研究.pdf

1、五沒食子?；咸烟牵╬entagalloylglucose，PGG）是一種天然多酚化合物，自然界中分布及其廣泛。之前的研究表明PGG 具有多種生物活性，具有治療和預(yù)防一些重要疾病如炎癥、腫瘤以及糖尿病的潛能，對宿主沒有毒副作用。卵巢癌是主要的婦科腫瘤之一，目前沒有有效的治療藥物。本課題選取不同的卵巢癌細(xì)胞株作為實(shí)驗(yàn)對象，研究五沒食子?；咸烟菍β殉舶┘?xì)胞增殖的影響，并初步探討可能的分子機(jī)制。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：
　　 1.

2、使用MTT 實(shí)驗(yàn)研究PGG在體外對卵巢癌HO-8910、HO-8910PM與SKOV-3細(xì)胞增殖的影響，使用普通光學(xué)倒置顯微鏡觀察PGG 處理后細(xì)胞形態(tài)改變。
　　 2.使用PI 單染流式細(xì)胞檢測分析PGG對卵巢癌細(xì)胞細(xì)胞周期分布影響；使用Hoechst 染色PGG 處理之后的細(xì)胞，在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞核形態(tài)的變化，看是否出現(xiàn)凋亡特征，然后使用AnnexinV-FITC/PI 雙染流式細(xì)胞分析檢測PGG對卵巢癌細(xì)胞凋亡率的影響

3、。
　　 3.Western blot 用于檢測細(xì)胞內(nèi)Caspase家族成員的剪切情況，出現(xiàn)Caspase 相應(yīng)的剪切小片段證明PGG 激活了細(xì)胞內(nèi)Caspase 凋亡信號通路；Western blot還用于檢測NF-κB 轉(zhuǎn)錄因子的P65 亞基與其抑制蛋白IκB在細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核中的分布變化，確定PGG對NF-κB信號通路的影響。
　　 4.RT-PCR 用來研究PGG對NF-κB的靶基因bcl-2、bcl-xl、cia

4、p-1、ciap-2、survivin、niap、xiap、cyclinD1轉(zhuǎn)錄影響，這些基因是腫瘤細(xì)胞中的促存活基因。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 1.PGG能以時間與濃度依賴的方式抑制卵巢癌細(xì)胞HO-8910、HO-8910PM與SKOV-3 體外增殖，當(dāng)PGG 劑量大于20μM，或作用時間達(dá)到48 h時，PGG對卵巢癌細(xì)胞的抑制呈現(xiàn)出明顯的時間與劑量依賴關(guān)系（P<0.05）。
　　 2.PGG 改變?nèi)曷殉舶┘?xì)胞

5、的細(xì)胞周期分布，誘導(dǎo)卵巢癌HO-8910與HO-8910PM細(xì)胞凋亡。隨著PGG 處理劑量增加與作用時間延長，細(xì)胞周期向S-期富集。Hoechst 染色顯示，PGG 誘導(dǎo)了HO-8910細(xì)胞的核發(fā)生凋亡樣形態(tài)改變，對SKOV-3細(xì)胞膜與細(xì)胞核形態(tài)沒有影響；AnnexinV-FITC 染色結(jié)合流式細(xì)胞分析顯示PGG 誘導(dǎo)HO-8910與HO-8910PM細(xì)胞凋亡出現(xiàn)早期凋亡，但是對SKOV-3細(xì)胞凋亡影響較小。
　　 3.PGG

6、處理之后卵巢癌細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)了幾個Caspases家族成員的活性形式，出現(xiàn)相應(yīng)的c-Caspase-9、3、7；PGG 雖然上調(diào)了外源性凋亡途徑中上游的腫瘤壞死因子受體表達(dá)，但是抑制了Caspase-8的剪切。
　　 4.PGG 處理卵巢癌細(xì)胞抑制轉(zhuǎn)錄因子NF-?B的P65 亞基核轉(zhuǎn)位，伴隨著其抑制性蛋白I?B在細(xì)胞質(zhì)中積累；相應(yīng)地，PGG下調(diào)了NF-?B的幾個靶基因bcl-2、bcl-xl、surviving、niap、xiap、