沒食子酸對(duì)人食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)與凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　惡性腫瘤已成為危害人類健康的嚴(yán)重疾病之一,目前腫瘤的治療方法包括傳統(tǒng)的手術(shù)、放療、化療以及近年來興起的基因治療等。但現(xiàn)在臨床使用的不少的治療腫瘤的化學(xué)類藥品靶向性不是很明確，這些藥物殺死了腫瘤細(xì)胞，然而一些正常的細(xì)胞也被殺死，于是抗腫瘤藥物的探究對(duì)象變成了那些高效、低毒的自然界的植物[1-4]。最近幾年，人們對(duì)癌癥的見解以及他們?cè)谂R床工作中的生活經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，得出結(jié)論"癌癥的形成是慢性病”逐漸被醫(yī)療界的人們所接受。"與腫瘤

2、并存”、減輕臨床方面癥狀、提升患者的生活質(zhì)量的觀念逐漸得到了國(guó)內(nèi)外各位專家學(xué)者的關(guān)注，中醫(yī)藥在治療癌癥方面的優(yōu)勢(shì)越來越突出，中醫(yī)藥在治療癌癥方面所取得的成就也逐漸被國(guó)際世界認(rèn)可。中醫(yī)藥在治療腫瘤方面已經(jīng)取得了相當(dāng)大的成就，尤其是開發(fā)植物的中草藥中提取的抗癌有效果組分。分析各種中醫(yī)藥的化學(xué)結(jié)構(gòu)式以及從他們之中提取抗腫瘤有效活性成分是當(dāng)前研究方向。本研究觀察了核桃青皮提取物沒食子酸對(duì)食管癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力的影響，以及對(duì)細(xì)胞周期和Cy

3、clinD1蛋白表達(dá)的影響，從而為進(jìn)一步開發(fā)核桃青皮來源的GA治療食管癌的中藥提取物提供理論根據(jù)。
　　方法:
　　本實(shí)驗(yàn)將食管癌細(xì)胞KYSE150培養(yǎng)起來后，利用細(xì)胞MTT比色法來檢測(cè)沒食子酸（gallic acid）對(duì)食管腫瘤細(xì)胞KYSE150的增殖抑制率、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)沒食子酸（gallic acid）對(duì)食管腫瘤細(xì)胞KYSE150的遷移能力、transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)核桃青皮提取物沒食子酸（gallic acid）對(duì)

4、食管腫瘤細(xì)胞KYSE150的侵襲能力，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)沒食子酸對(duì)食管癌細(xì)胞KYSE150細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期時(shí)相性分布的影響，而且利用Western Blot檢測(cè)經(jīng)過沒食子酸處理過后的食管腫瘤細(xì)胞KYSE150中的CyclinD1蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.食管腫瘤細(xì)胞KYSE150的抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的作用：核桃青皮提取物沒食子酸濃度分別為10、20、40、80、120μg/mL時(shí)，對(duì)KYSE150的抑制率分別為4.15％

5、、19.02%、69.64%、90.51%、93.35%（F=57.48，P<0.05）。
　　2.核桃青皮提取物沒食子酸處理24 h后食管腫瘤細(xì)胞KYSE150的遷移能力明顯下降，隨著濃度的增加，遷移率逐漸降低，當(dāng)GA濃度分別為0、20、40、80μg/mL時(shí)，對(duì)KYSE150的遷移率分別為77%、51%、17%、7%，食管腫瘤細(xì)胞的遷移能力與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=440.49，P<0.01）。
　　3.Tra

6、nswell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)GA對(duì)KYSE150細(xì)胞侵襲能力的影響：結(jié)果通過計(jì)數(shù)穿過膜的細(xì)胞來判定，結(jié)果顯示經(jīng)GA處理48 h后的細(xì)胞侵襲能力明顯下降，隨著濃度的增加，穿膜細(xì)胞數(shù)逐漸減少，當(dāng)GA濃度分別為0、20、40、80μg/mL時(shí)， KYSE150細(xì)胞穿膜數(shù)分別為124.66±5.50、87.33±8.62、51.00±9.53、36.00+9.54，食管腫瘤細(xì)胞的侵襲能力與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=74.65，P<0.01）

7、。
　　4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)GA對(duì)KYSE150細(xì)胞周期的影響：隨著GA濃度的增加， G0/G1期的細(xì)胞比例增加， S期和G2/M期的細(xì)胞比例減少。當(dāng)沒食子酸的濃度分別為10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL時(shí)，G0/G1期的細(xì)胞比例分別為33.49%、35.80%、40.48%，呈遞增趨勢(shì)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），S期的細(xì)胞數(shù)分別為46.60%、45.60%、45.29%，呈遞減趨勢(shì)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0

8、.05）， G2/M期亦呈遞減趨勢(shì)。
　　5.細(xì)胞凋亡的檢測(cè)：GA能誘導(dǎo)食管腫瘤細(xì)胞的凋亡，并且它的凋亡率隨著沒食子酸藥物濃度的遞增而增加，呈明顯劑量依懶性。
　　6.Western Blot法測(cè)定食管腫瘤細(xì)胞KYSE150 CyclinD1蛋白的表達(dá)：對(duì)加完核桃青皮提取物沒食子酸的食管腫瘤細(xì)胞KYSE150進(jìn)行提蛋白，實(shí)驗(yàn)以β-actin蛋白為內(nèi)參，與空白對(duì)照組相比，對(duì)結(jié)果采用Quantity one圖像處理軟件進(jìn)行灰度分