呼出氣冷凝液中TNF-α和IL-1β與肺功能和并發(fā)癥的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：呼出氣冷凝液（Exhaled breath condensate,EBC）是一種近年來(lái)非常流行的、具有完全無(wú)創(chuàng)傷、操作簡(jiǎn)單方便等眾多優(yōu)點(diǎn)的呼吸系統(tǒng)疾病的檢測(cè)方法。呼出氣冷凝液中含有大量的介質(zhì)因子，目前認(rèn)為分子質(zhì)量小于65ku的小分子物質(zhì)均可以進(jìn)入呼出氣冷凝液中。慢性阻塞性肺疾?。–OPD）是一種非常常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)慢性疾病，在實(shí)際的臨床工作中，接受手術(shù)的胸外科病人中有大部分病人合并有慢性阻塞性肺疾病，而我們通常使用的肺功能檢查指標(biāo)反

2、映的僅僅是患者的的通氣功能，并沒(méi)有直接反映患者的肺部病理生理狀態(tài)的指標(biāo)，所以我們只依靠肺功能的檢查結(jié)果來(lái)判斷病人的真實(shí)肺部功能狀態(tài)有可能造成一定的偏差，從而影響主治醫(yī)師對(duì)于患者的手術(shù)實(shí)施難度、術(shù)后恢復(fù)的判斷以及術(shù)后并發(fā)癥的預(yù)防等各個(gè)方面的判斷。實(shí)際的臨床工作中，我們常常遇到這種的情況，肺功能顯示各項(xiàng)指標(biāo)很差的病人，術(shù)后恢復(fù)相當(dāng)順利，沒(méi)有任何并發(fā)癥的發(fā)生。更加令人意外的是，很多肺功能結(jié)果很好的病人，手術(shù)反而出現(xiàn)很多并發(fā)癥，術(shù)后恢復(fù)緩慢，這

3、就要求我們更加重視患者的真實(shí)肺部病理生理狀態(tài)，及時(shí)的加于外力干預(yù)，術(shù)前術(shù)后給予肺保護(hù)的預(yù)防和康復(fù)治療，有可能給患者的生命健康提供更加強(qiáng)有力的保證。如何更準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)患者的術(shù)前肺功能，真實(shí)的反映患者的肺部病理生理狀態(tài)，我們展開(kāi)以下研究，本研究主要解決以下幾個(gè)問(wèn)題：
　　1.呼出氣冷凝液中能否檢測(cè)出TNF-α和IL-1β兩種物質(zhì)。
　　2.呼出氣冷凝液中 TNF-α以及 IL-1β的含量能否直接反映肺組織中 TNF-α及IL-1β

4、的含量。
　　3.呼出氣冷凝液及肺組織中TNF-α和IL-1β的含量能否放映肺功能的水平。
　　4.經(jīng)過(guò)肺保護(hù)治療后，呼出氣冷凝液中TNF-α和IL-1β的含量是否有所變化。
　　方法：選取2015年1月至2015年6月在天津市胸科醫(yī)院住院因肺癌行肺葉切除手術(shù)的患者60例，入院后首先檢測(cè)肺功能指標(biāo)，根據(jù)肺功能結(jié)果分為三組，即COPD治療組，COPD對(duì)照組，非COPD組，其中COPD治療組入院后給予1周肺保護(hù)治療以改善肺

5、功能，其他兩組不予任何肺保護(hù)治療。COPD對(duì)照組與非COPD組術(shù)前第一天收集呼出氣冷凝液和動(dòng)脈血?dú)?，COPD治療組術(shù)前第七天及術(shù)前第一天分別收集呼出氣冷凝液及動(dòng)脈血?dú)?三組術(shù)后第一天及第七天全部收集呼出氣冷凝液及動(dòng)脈血?dú)?，術(shù)中收集肺組織標(biāo)本；收集的呼出氣冷凝液儲(chǔ)存于-80℃的冰箱中待測(cè)，用ELISA法檢測(cè)呼出氣冷凝液和肺組織中TNF-α和IL-1β的含量；手術(shù)切除的肺葉標(biāo)本距離病灶5厘米以上，快速取1cm3大小的肺組織3塊，分別用于石蠟

6、切片免疫熒光（ Immunofluorescence）檢測(cè)及用ELISA法檢測(cè)肺組織中TNF-α與IL-1β含量以及透射電子顯微鏡（Transmission Electron Microscopy，TEM）觀察。用于免疫熒光檢測(cè)的肺組織標(biāo)本用10％福爾馬林固定，石蠟包埋，制成4微米厚度切片;用ELISA法檢測(cè)肺組織中TNF-α與IL-1β含量的肺組織置于-80℃的冰箱中保存，用于TEM觀察的肺組織標(biāo)本立即置入標(biāo)本固定液中，低溫0-4℃條

7、件下送至電鏡室。
　　結(jié)果：1.呼出氣冷凝液中：COPD治療組：TNF-α的含量均值在術(shù)前第七天，術(shù)前第一天，術(shù)后第一天，術(shù)后第七天分別為0.838pg/μl，0.4638pg/μl，0.6643pg/μl，0.2507pg/μl；IL-1β的含量均值在術(shù)前第七天，術(shù)前一天，術(shù)后第一天，術(shù)后第七天分別為3.7162pg/μl，1.4129pg/μl，2.2569pg/μl，0.8489pg/μl；COPD對(duì)照組：TNF-α的含量均

8、值在術(shù)前第一天，術(shù)后第一天，術(shù)后第七天分別為0.7282pg/μl，0.8353pg/μl，0.3979pg/μl；IL-1β的含量均值在術(shù)前第一天，術(shù)后第一天，術(shù)后第七天分別為2.9012pg/μl，3.3221pg/μl，1.3832pg/μl。非COPD組：TNF-α的含量均值在術(shù)前第一天，術(shù)后第一天，術(shù)后第七天的分別為0.4513pg/μl，0.5025pg/μl，0.2746pg/μl；IL-1β的含量均值在術(shù)前第一天，術(shù)后第

9、一天，術(shù)后第七天分別為1.3317pg/μl，1.7316pg/μl，0.6362pg/μl。2.三組患者肺組織中TNF-α的含量均值在COPD治療組，COPD對(duì)照組，非COPD組分別為0.0291pg/μl，0.0417pg/μl，0.0323pg/μl；IL-1β的含量均值在COPD治療組，COPD對(duì)照組，非COPD組分別為0.0297pg/μl，0.0640pg/μl，0.0257pg/μl。
　　3.石蠟切片免疫熒光結(jié)果：

10、COPD治療組，COPD對(duì)照組，非COPD組所有照片的IL-1β分布平均光密度值（mean density）分別為3.60×10-4，3.69×10-4，3.40×10-4；COPD治療組，COPD對(duì)照組，非COPD組所有照片的TNF-α分布平均光密度值分別為10.15×10-4，11.81×10-4，8.89×10-4。
　　結(jié)論:1.呼出氣冷凝液中 TNF-α和 IL-1β的含量可以放映肺組織中 TNF-α和IL-1β的含量，

11、且成正相關(guān)。2.呼出氣冷凝液與肺組織中TNF-α和IL-1β的含量可以反映肺功能狀態(tài)。3.呼出氣冷凝液中TNF-α和IL-1β的含量在COPD組顯著高于非COPD組；COPD治療組中，經(jīng)過(guò)一周肺保護(hù)之后，TNF-α和IL-1β的含量顯著下降，手術(shù)后，TNF-α和 IL-1β的含量又明顯上升，術(shù)后行肺保護(hù)后TNF-α和IL-1β的含量又明顯下降，說(shuō)明術(shù)前肺保護(hù)對(duì)COPD的炎性反應(yīng)及應(yīng)激變化有明顯影響。4.肺組織中TNF-α與IL-1β的含