大鼠肝門阻斷過程中捫摸對(duì)肝臟熱缺血再灌注損傷的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 探討在肝臟外科手術(shù)過程當(dāng)中，手術(shù)操作本身即捫摸對(duì)大鼠在體肝臟熱缺血再灌注損傷的影響及意義;探討捫摸影響肝臟熱缺血再灌注損傷可能的機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.模型制作:
　　 將30只清潔級(jí)(SPF)雄性SD大鼠(Sprague-Dawleyrat)隨機(jī)分成三組:假手術(shù)組（Sham組）、肝臟缺血再灌注組（IR組）、捫摸組（MN組），每組10只。Sham組僅行剖腹、肝鐮狀韌帶游離、肝十二指腸

2、韌帶暴露，不行任何其他手法操作;IR組開腹后充分暴露肝門，解剖并分離供應(yīng)肝中葉和右葉的動(dòng)脈、靜脈和膽管，并使用無創(chuàng)動(dòng)脈夾阻斷15min，再灌注2h;MN組操作同IR組，且在肝門阻斷過程中對(duì)大鼠肝臟右葉進(jìn)行輕柔擠壓及摩擦2min×5次，每次手法操作間隔1min，操作力度相同、適中，避免對(duì)肝葉造成機(jī)械性損傷。
　　 2.觀測(cè)指標(biāo):
　　 血清轉(zhuǎn)氨酶水平改變:各組大白鼠在再灌注2h后分別取門靜脈血進(jìn)行血清轉(zhuǎn)氨酶ALT及AST定

3、量檢測(cè)（u/l）。
　　 肝組織病理學(xué)檢查:取肝組織行H-E染色觀察肝組織損傷情況并行損傷分級(jí)評(píng)分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):0分:靜脈血管及肝小葉內(nèi)無炎性細(xì)胞浸潤及肝細(xì)胞變性、壞死;1分:匯管區(qū)少量炎細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞少量變性及壞死;2分:肝小葉內(nèi)散在肝細(xì)胞變性及灶狀壞死，肝組織內(nèi)較多炎性細(xì)胞浸潤，肝小葉結(jié)構(gòu)尚完整;3分:肝竇、肝中央靜脈內(nèi)淤血，廣泛肝細(xì)胞變性、壞死，肝組織大量炎性細(xì)胞浸潤，部分肝小葉破壞。每個(gè)標(biāo)本隨機(jī)取5個(gè)視野損傷評(píng)分平均值作

4、為每個(gè)標(biāo)本評(píng)分值。
　　 肝組織腫瘤壞死因子-α(Tumornecrosisfactor-α，TNF-α)和P-選擇素(P-selectin)表達(dá)水平測(cè)定:使用免疫組化法（Sp法）測(cè)量肝組織TNF-α和P-選擇素表達(dá)水平，結(jié)果用平均陽性灰度值表達(dá)。
　　 所有定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用單因素方差分析LSD法。SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)

5、果：
　　 1.血清肝臟轉(zhuǎn)氨酶水平測(cè)定結(jié)果:
　　 IR組血清ALT水平（251.87±50.80U/L）和MN組血清ALT水平（366.75±89.45U/L）較Sham組（57.25±16.05U/L）明顯升高(P=0.000＜0.05，F(xiàn)=54.19)，其中MN組較IR組ALT水平明顯增高(P=0.000＜0.05);IR組血清AST水平（226.75±19.12U/L）和MN組血清AST水平（792.25±87.

6、71U/L）較Sham組（76.50±12.38U/L）明顯升高(P=0.000＜0.05，F(xiàn)=416.21);上述測(cè)量指標(biāo)MN組較IR組均明顯增高(P=0.000＜0.05)。
　　 2.光鏡下肝組織病理改變及損傷評(píng)分結(jié)果:
　　 Sham組肝組織光鏡下觀察可見肝小葉、肝竇及肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)均正常，未見有明顯的肝細(xì)胞變性及壞死，匯管區(qū)內(nèi)未見有明顯炎癥細(xì)胞浸潤;IR組肝組織光鏡下可見匯管區(qū)及肝竇內(nèi)有少量炎癥細(xì)胞浸潤，部分肝細(xì)

7、胞索結(jié)構(gòu)破壞，肝小葉內(nèi)散在肝細(xì)胞變性及壞死，肝小葉結(jié)構(gòu)尚正常;MN組觀察見肝組織內(nèi)肝竇及匯管區(qū)嚴(yán)重瘀血，同時(shí)有大量的炎性細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)紊亂，肝小葉內(nèi)可見大量肝細(xì)胞變性及肝細(xì)胞壞死。評(píng)分結(jié)果:IR組肝組織病理評(píng)分（0.93±0.13）和MN組肝組織病例評(píng)分（2.10±0.15）分別比Sham組（0.15±0.12）高(P=0.001＜0.05)，而MN組較IR組肝組織病理評(píng)分明顯增高(P=0.000＜0.05)。
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8、.肝組織TNF-α和P-選擇素表達(dá)情況:
　　 TNF-α和P-選擇素在三組中的表達(dá)有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05):其中IR組肝組織TNF-α表達(dá)的平均陽性灰度值水平（132.08±4.84）和MN組TNF-α平均陽性灰度值（150.50±12.11）較Sham組（85.52±6.31）明顯升高(P=0.000＜0.05，F(xiàn)=128.19);IR組肝組織P-選擇素表達(dá)的平均陽性灰度值水平（142.14±3.60）和MN組P-

9、選擇素平均陽性灰度值（151.91±2.36）較Sham組（91.05±2.66）明顯升高(P=0.000＜0.05，F(xiàn)=1000.39)，上述兩指標(biāo)在MN組中表達(dá)水平較IR組均明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.000＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.捫摸可加重大鼠在體肝臟熱缺血再灌注損傷，因此在肝臟外科手術(shù)操作過程當(dāng)中應(yīng)盡量減少對(duì)其進(jìn)行捫摸。
　　 2.捫摸加重肝臟熱缺血再灌注損傷的機(jī)制可能由于捫摸引起