聚賴氨酸基非病毒載體的設(shè)計與制備.pdf

1、本文開展了利用結(jié)構(gòu)明確含糖和組氨酸甲酯結(jié)構(gòu)單元多功能聚合物修飾的聚賴氨酸(PLL)基非病毒基因載體的研究。 首先，利用可逆加成斷裂鏈轉(zhuǎn)移(RAFT)自由基聚合方法合成了不同分子鏈長的含糖聚合物(DPMAEL)，然后通過共價接枝的方法將其引入到PLL上，得到PLL-g-DPMAEL。通過優(yōu)化DPMAEL的鏈長和接枝度，調(diào)節(jié)PLL的聚陽離子性質(zhì)。在降低PLL過高的連續(xù)正電荷密度的同時保留其良好的質(zhì)粒DNA(pDNA)壓縮和保護能力，調(diào)節(jié)PL

2、L-g-DPMAEL/pDNA復(fù)合物納米粒子與細(xì)胞之間的相互作用而改善PLL的基因轉(zhuǎn)染效率。NIH3T3和HepG2細(xì)胞的體外轉(zhuǎn)染試驗證明PLL-g-DPMAEL具有非常低的細(xì)胞毒性，能有效壓縮pDNA形成穩(wěn)定的PLL-g-DPMAEL/pDNA復(fù)合物納米粒子，PLL-g-DPMAEL與pDNA之間具有適當(dāng)?shù)撵o電相互作用強度，能及時將pDNA從復(fù)合物納米粒子中釋放出來。相對于PLL/pDNA，PLL-g-DPMAEL/pDNA復(fù)合物納米

3、粒子的基因轉(zhuǎn)染效率明顯提高。我們又進一步利用RAFT方法將具有質(zhì)子緩沖能力的組氨酸甲酯單體與含乳糖單體共聚得到了P(His-co-DMAEL)。通過非靜電組裝的方法將P(His-co-DMAEL)，PLL和pDNA組裝成PLL/DNA/P(His-co-DMAEL)三元復(fù)合物納米粒子，考察了其在電解質(zhì)、酶以及血清中的穩(wěn)定性和抗聚集能力。結(jié)果表明，PLL/DNA/P(His-co-DMAEL)三元復(fù)合物納米粒子具有非常好的穩(wěn)定性和抗聚集能

4、力。NIH3T3，HeLa和HepG2細(xì)胞的體外轉(zhuǎn)染試驗證明，在血清條件下，PLL/DNA/P(His-co-DMAEL)三元復(fù)合物納米粒子具有較高的細(xì)胞內(nèi)吞效率和基因轉(zhuǎn)染效率。
　　 最后，我們分別使用共價接枝法和非靜電組裝法將P(HiS-co-DMAEL)引入到PLL/pDNA復(fù)合物納米粒子中，對比了P(His-co-DMAEL)的引入方法對PLL/pDNA的性質(zhì)和基因轉(zhuǎn)染效率的影響。結(jié)果表明，采用共價接枝法，P(His-c

5、o-DMAEL)的量會對PLL/pDNA的性質(zhì)及基因轉(zhuǎn)染效率產(chǎn)生截然不同的影響。P(His-co-DMAEL)的量較少時能極大地改善PLL/pDNA的性質(zhì)，提高其基因轉(zhuǎn)染效率。而P(His-co-DMAEL)的量較多時會影響PLL對pDNA壓縮能力而影響PLL/pDNA的基因轉(zhuǎn)染效率。
　　 采用非靜電組裝法，P(His-co-DMAEL)的量越多，PLL/pDNA的性質(zhì)改善越明顯，基因轉(zhuǎn)染效率越高。這些結(jié)果表明，用DPMAEL