白藜蘆醇對佐劑性關節(jié)炎大鼠關節(jié)滑膜組織中MnSOD-SIRT3表達的影響.pdf

1、背景：
　　在類風濕關節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）的發(fā)病機理中，氧化應激性反應是一個重要因素致病因素，由于RA患者關節(jié)疼痛和功能受限等原因，患者需要長期治療，改變了生活方式，使機體處于應激狀態(tài)，出現(xiàn)脂質過氧化反應，增加了氧自由基（oxygen free radical，ROS）的生成，ROS在機體蓄積，引起機體損傷。目前，在RA動物模型的制備中，利用弗氏完全佐劑（Freund's complete adj

2、uvant，F(xiàn)CA）制備佐劑性關節(jié)炎（adjuvant arthritis，AA）大鼠模型較為常用，因為在形態(tài)學上和RA改變相似，而且造模較為簡單，因此，該模型常用于篩選RA藥物。錳超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase，MnSOD）是重要的金屬抗氧化酶，存在于真核細胞線粒體中，可以將超氧陰離子自由基（superoxide anion free radical）(O.-)2特異性的轉化為 H2O2和

3、 O2，由于線粒體不僅是機體細胞中氧化磷酸化代謝和產(chǎn)生能量的場所，而且是自由基產(chǎn)生的重要場所，因此，在抗氧化損傷中線粒體作用顯著。同時，在機體的線粒體中，存在去乙酰化酶（sirtuins, SIRTs）家族中的去乙?；?（Sirtuin3，SIRT3），SIRT3具有去乙?；富钚?，在調節(jié)機體的線粒體能量代謝和抗氧化應激中具有作用。白藜蘆醇（resveratrol，Res）是多酚類化合物，屬于植物抗毒素，文獻報道 Res具有抗炎、抗氧

4、化、抗腫瘤等功能，本研究體外探討Res對RA是否具有抗氧化作用及與線粒體MnSOD-SIRT3信號通路的關系。
　　目的：
　　觀察佐劑性關節(jié)炎（AA）大鼠體內(nèi)的氧化應激狀況，關節(jié)滑膜組織中錳超氧化物歧化酶（MnSOD）、去乙?；?（SIRT3）的表達，體外培養(yǎng)滑膜細胞，檢測 Res對低過氧化氫（hydrogen peroxide，H2O2）誘導的成纖維樣滑膜細胞（fibroblast-like synoviocytes，

5、FLS）增殖的影響，探討線粒體MnSOD-SIRT3信號通路在Res抑制AA大鼠FLS改變中的作用。
　　方法：
　　10只SD大鼠足趾皮下注射0.1ml弗氏完全佐劑（Freund's complete adjuvant， FCA）誘導AA，另取10只大鼠，皮下注射等量磷酸緩沖鹽溶液（phosphate-buffered saline，PBS）作為對照組；造模后d28，股動脈放血處死大鼠，留取血清，應用分光光度計，檢測兩組大

6、鼠機體的氧化應激指標，硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid， TBA）法檢測丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量、羥胺法檢測超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活力、比色法測定谷胱甘肽過氧化物酶（glutathion peroxidase，GSH-Px）活性；HE染色觀察兩組大鼠踝關節(jié)結構變化；免疫組織化學法SP法觀察兩組滑膜組織中去乙酰化酶3（SIRT3）、錳超氧化物歧化酶

7、（MnSOD）蛋白的表達，并進行算機圖像分析系統(tǒng)處理測定兩種蛋白的平均光密度(optical density，OD）值。體外研究，組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)大鼠滑膜細胞，羊抗大鼠血管細胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecular-1，VCAM-1）多克隆抗體鑒定， CCK-8法觀察Res對低濃度（5μmol/L）的H2O2對FLS的增殖影響，Western blot檢測AA大鼠FLS的氧化應激相關蛋白SIRT3

8、、MnSOD蛋白的表達。
　　結果：
　?。?）與正常組大鼠比較，AA模型大鼠血清氧化應激指標MDA含量、GSH-PX活性、SOD活力差異均顯著（P<0.01）；HE染色顯示，AA模型大鼠關節(jié)滑膜組織增生，炎細胞浸潤；免疫組化染色呈現(xiàn) AA模型大鼠滑膜組織呈棕黃色顆?；螯S色顆粒，計算機圖像分析結果模型組線粒體氧化應激SIRT3、MnSOD蛋白表達增加。（2）體外實驗表明，免疫熒光染色顯示，VCAM-1多克隆抗體鑒定為成纖維樣