跨膜蛋白106A導(dǎo)致肝癌細(xì)胞空泡化的現(xiàn)象和機制研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　跨膜蛋白106A是隸屬于跨膜蛋白106家族的一個成員，目前其具體功能不明。已有的文獻證明該基因在胃癌細(xì)胞系中存在甲基化現(xiàn)象，而恢復(fù)表達(dá)后可以抑制胃癌細(xì)胞生長，同時發(fā)現(xiàn)該基因可能是一個腫瘤抑制基因，可以誘導(dǎo)部分肝癌細(xì)胞發(fā)生空泡化現(xiàn)象。為了進一步研究該基因的詳細(xì)功能，本研究從前期空泡化現(xiàn)象的表型入手，通過檢索國內(nèi)外胞質(zhì)空泡化現(xiàn)象的相關(guān)文獻，發(fā)現(xiàn)其與胞飲現(xiàn)象的關(guān)系。然后通過在細(xì)胞水平超表達(dá)TMEM106A，發(fā)現(xiàn)了該

2、基因?qū)е驴张莼F(xiàn)象的可能原因，為該基因的進一步功能研究提供了資料。
　　研究方法：
　?、僭诟伟┘?xì)胞HuH-7，HepG2，PLC/PRF/5中超表達(dá)TMEM106A，觀察空泡化現(xiàn)象是否出現(xiàn);②在出現(xiàn)空泡化現(xiàn)象的細(xì)胞系中進行表型研究，包括空泡化現(xiàn)象的可逆性，空泡化現(xiàn)象的時間和空泡化現(xiàn)象的結(jié)局，利用中性紅染色觀察細(xì)胞性質(zhì)，同時電鏡觀察空泡化現(xiàn)象的細(xì)胞內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)變化，確定空泡化現(xiàn)象來源的可能細(xì)胞器;③通過表型研究確定可能來源的

3、細(xì)胞器后，通過文獻查找相關(guān)的通路，并購買相應(yīng)的抑制劑，利用抑制劑實驗篩選關(guān)鍵蛋白;④western檢測通路關(guān)鍵分子變化。
　　研究結(jié)果：
　　①實驗觀察到在HuH-7，HepG2細(xì)胞中超表達(dá)TMEM106A后出現(xiàn)空泡化現(xiàn)象，而PLC/PRF/5細(xì)胞中沒有空泡化現(xiàn)象出現(xiàn);②中性紅實驗發(fā)現(xiàn)空泡為可被中性紅染色，電鏡觀察到在HepG2細(xì)胞中的空泡有板狀偽足樣結(jié)構(gòu)，可能來源于細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu);③空泡內(nèi)部板狀偽足樣結(jié)構(gòu)，細(xì)胞體積增大等現(xiàn)