大黃素對STZ大鼠腎臟組織Toll樣受體4、NF-κB及白細(xì)胞介素-6表達(dá)影響的實驗研究.pdf

1、目的：通過觀察大黃素對STZ大鼠腎臟組織Toll樣受體4（TLR4）、NF-κB及白細(xì)胞介素-6(IL-6)表達(dá)的影響，闡述其防治糖尿病腎臟病變的可能作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用清熱類中藥防治糖尿病腎病(Diabetic nephropathy，DN)慢性并發(fā)癥提供理論依據(jù)。
　　方法：50只成年雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分成兩組，其中10只為正常對照組，40只為造模組。造模組大鼠禁食12h后，一次性腹腔注射1％鏈脲佐菌素STZ60mg/

2、kg（臨用前用0.1M檸檬酸鈉緩沖液，配制STZ溶液，濃度為1％、pH＝4.2），正常對照組腹腔注射同等劑量檸檬酸鈉緩沖液。72h后，用血糖儀測尾靜脈，血糖≥16.7mmol/L者確定為糖尿病大鼠，未達(dá)此標(biāo)準(zhǔn)者予以排除。成模后，隨機(jī)抽取20只，分為糖尿病模型組（10只），大黃素干預(yù)組（10只）。大黃素干預(yù)組按100mg/（kg體重）灌胃，正常對照組和糖尿病模型組每日給予同等劑量生理鹽水灌胃。實驗期間，各組大鼠自由進(jìn)食進(jìn)水。連續(xù)灌胃8周后

3、，禁食12h，所有大鼠腹腔注射戊巴比妥（3％、80mg/kg）進(jìn)行麻醉，開腹，于腹主動脈采血，取5~6 mL測血糖、血脂、肝功能、腎功能水平，剪開后腹膜，取下左側(cè)腎臟，稱量腎重，計算相對腎重（腎重/體重），并以4%多聚甲醛固定，以免疫組化染色 SP法處理腎臟組織切片，并觀察病理切片中 TLR4、NF-κB、IL-6陽性表達(dá)。計量資料均采用X——±S表示，各組干預(yù)前后的比較采用配對 t檢驗；各組間比較采用單因素方差分析，方差不齊時采用Kr

4、uskal-Wallis H檢驗，所有數(shù)據(jù)用SPSS21.0軟件統(tǒng)計處理，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.對大鼠一般狀態(tài)的影響
　　正常對照組大鼠皮毛光澤，反應(yīng)靈敏，飲食、活動均正常，體質(zhì)量增加明顯。糖尿病模型組及大黃素干預(yù)組大鼠皮毛暗淡欠光澤，飲水、攝食均增加約2倍左右，尿量增多2-3倍，大便稀軟，反應(yīng)遲緩，體質(zhì)量增加緩慢，抱團(tuán)少動。
　　2.對血糖的作用
　　治療前，與正常對照組相比，糖尿病

5、模型組、大黃素干預(yù)組血糖明顯升高（P<0.05）；大黃素干預(yù)組與糖尿病模型組相比血糖無明顯差異（P>0.05）。治療后，與正常對照組相比，糖尿病模型組、大黃素干預(yù)組血糖明顯升高（P<0.05）；大黃素干預(yù)組與糖尿病模型組相比，血糖無明顯差異（P>0.05）。各組大鼠治療前后血糖無明顯差異（P>0.05）。
　　3.對血脂的作用
　　對膽固醇的影響：灌胃治療8周后，與正常對照組相比，糖尿病模型組、大黃素干預(yù)組膽固醇無明顯差異（

6、P>0.05）；與糖尿病模型組相比，大黃素干預(yù)組膽固醇無明顯差異（P>0.05）；對甘油三酯的影響：治療后，與正常對照組相比，糖尿病模型組、大黃素干預(yù)組甘油三酯無明顯差異（P>0.05）；與糖尿病模型組相比，大黃素干預(yù)組甘油三酯無明顯差異（P>0.05）。
　　4.對丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）的影響
　　灌胃治療8周后，各組ALT、AST、Cr、BUN水平組間相比均

7、無明顯差異（P>0.05）。
　　5.對TLR4表達(dá)的影響
　　灌胃治療8周后，與正常對照組相比，糖尿病模型組及大黃素干預(yù)組TLR4表達(dá)明顯升高（P<0.05）；與糖尿病模型組相比，大黃素干預(yù)組TLR4蛋白表達(dá)明顯降低（P<0.05）。
　　6.對NF-κB表達(dá)的影響
　　灌胃治療8周后，與正常對照組相比，糖尿病模型組及大黃素干預(yù)組NF-ΚB表達(dá)明顯升高（P<0.05）；與糖尿病模型組相比，大黃素干預(yù)組NF-κB

8、蛋白表達(dá)明顯降低（P<0.05）。
　　7.對IL-6表達(dá)的影響
　　灌胃治療8周后，與正常對照組相比，糖尿病模型組及大黃素干預(yù)組IL-6表達(dá)明顯升高（P<0.05）；與糖尿病模型組相比，大黃素干預(yù)組IL-6蛋白表達(dá)明顯降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.TLR4、NF-κB、IL-6蛋白在正常對照組大鼠腎臟組織中低表達(dá)，而在糖尿病模型組及大黃素干預(yù)組高表達(dá)，表明TLR4、NF-κB、IL-6參與了糖尿病