新化合物TMZ-POH在非小細(xì)胞肺癌中的抗腫瘤作用及其對(duì)DNA修復(fù)蛋白MGMT的調(diào)控.pdf

1、背景：非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)在肺癌中占80％，化療是臨床上常用的治療方法之一，但是嚴(yán)重的毒副作用及化療耐藥的發(fā)生在很大程度上影響了其治療效果。替莫唑胺(Temozolomide，TMZ)是烷化劑類藥物氮烯唑胺的衍生物，紫蘇醇(Perillyl alcohol，POH)在多種類型的腫瘤中對(duì)TMZ具有治療增敏作用。TMZ-POH是將TMZ和POH以共價(jià)鍵連接形成的新型烷化劑，在三陰性乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、人類鼻咽癌，甚至是TMZ耐藥的神

2、經(jīng)膠質(zhì)瘤中，TMZ-POH比TMZ、POH單獨(dú)用藥或二者聯(lián)合應(yīng)用具有更強(qiáng)的抗腫瘤作用。MGMT是一種進(jìn)化保守的酶，在多種癌癥中的高表達(dá)往往提示預(yù)后較差，且表達(dá)水平受到多重作用機(jī)制的調(diào)控。MGMT能夠移除TMZ的細(xì)胞毒性產(chǎn)物O6-meG，并使其失活，這是MGMT誘導(dǎo)TMZ化療耐藥發(fā)生的決定性因素。在不同腫瘤細(xì)胞中的研究發(fā)現(xiàn)，TMZ-POH與TMZ等烷化劑不同，前者即使在MGMT高表達(dá)的細(xì)胞系中同樣能發(fā)揮較強(qiáng)的細(xì)胞毒性作用，這意味著TMZ-

3、POH可能通過調(diào)控MGMT來克服在其他烷化劑中發(fā)生的耐藥。
　　目的：研究TMZ-POH對(duì)非小細(xì)胞肺癌的抗腫瘤作用，并探索其作用機(jī)制是否與ROS累積相關(guān);研究TMZ-POH對(duì)MGMT的調(diào)控作用以及MGMT對(duì)TMZ-POH細(xì)胞毒性的影響。
　　方法：將TMZ和POH以共價(jià)鍵連接形成新型烷化劑TMZ-POH，將其作用于所培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞系，通過細(xì)胞活性測(cè)定、克隆形成實(shí)驗(yàn)、活性氧ROS測(cè)定、線粒體膜電位定位測(cè)定和蛋白印跡等體外實(shí)驗(yàn)以

4、及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究TMZ-POH的抗腫瘤作用及機(jī)制。
　　結(jié)果：TMZ-POH對(duì)NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549、H460和H520均具有細(xì)胞毒性作用，上調(diào)磷酸化的ATM、CHEK1、CHEK2、H2AFX蛋白表達(dá)，將細(xì)胞周期阻滯在G2/M期，并且導(dǎo)致細(xì)胞凋亡、線粒體膜電位降低和活性氧累積;TMZ-POH在A549和SPC-A1(NSCLC來源)、A2780（卵巢癌來源系）以及CNE2（人鼻咽癌來源）等多種細(xì)胞系中，均能下調(diào)MGMT蛋白表達(dá)，

5、在A549和SPC-A1細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)，該調(diào)控作用不引起Wnt/β-catenin通路上的β-catenin以及GSK-3β表達(dá)水平的差異，用蛋白酶體抑制劑MG132進(jìn)行預(yù)處理之后，TMZ-POH誘導(dǎo)了更高水平的泛素化。
　　結(jié)論：新型化合物TMZ-POH在NSCLC中具有抗腫瘤作用，這種抗腫瘤作用是通過介導(dǎo)ROS累積完成的，能導(dǎo)致線粒體膜電位降低、線粒體凋亡、DNA損傷和細(xì)胞周期阻滯，進(jìn)而抑制腫瘤生長(zhǎng)。TMZ-POH能通過獨(dú)立的蛋