CMT-8作為抗腫瘤與放射增敏新化合物的初步研究.pdf

1、目的:探討化學(xué)修飾四環(huán)素的衍生物-8(chemically modified tetracycline-8)作為一種新的抗腫瘤化合物，對不同種類腫瘤細胞的增殖、遷移、細胞周期的影響以及對腫瘤細胞放射敏感性的影響。
　　 方法:采用MTT比色法檢測CMT-8對正常人皮膚成纖維細胞GM，宮頸癌細胞HeLa和SiHa，乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231，小細胞肺癌細胞NCI-H446，前列腺癌細胞DU-145以及鼻咽癌細胞CN

2、E-1的生長抑制作用;采用光學(xué)顯微鏡觀察細胞形態(tài)改變;體外劃痕實驗檢測細胞的遷移能力;流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡的改變;磷脂酰絲氨酸外翻法檢測細胞凋亡;Western blot法檢測相關(guān)蛋白的表達。采用MTT比色法及克隆形成法檢測CMT-8對宮頸癌細胞HeLa放射敏感性的影響。
　　 結(jié)果:(1)CMT-8能明顯抑制多種腫瘤細胞的生長和增殖，即CMT-8具有廣譜的抑制腫瘤細胞增殖作用，并呈時間依賴和濃度依賴關(guān)系。24小時CMT

3、-8處理的不同種類細胞的敏感性分別為:MDA-MB-231＞CNE-1＞DU-145＞NCI-H446＞MCF-7＞HeLa＞SiHa＞GM細胞，而且對腫瘤細胞的抑制作用大于對正常細胞(GM細胞)的影響。(2)體外劃痕實驗表明低濃度的CMT-8明顯抑制乳腺癌細胞MCF-7，MDA-MB-231以及宮頸癌細胞HeLa的遷移能力。(3)流式細胞儀檢測顯示CMT-8可以導(dǎo)致MCF-7細胞的S期阻滯，而引起HeLa細胞GO/Gl期阻滯。然而對M

4、DA-MB-231的細胞周期并不產(chǎn)生明顯的影響，但可以誘導(dǎo)sub-Gl峰的出現(xiàn)。這些結(jié)果表明雖然CMT-8可以抑制不同種類腫瘤細胞生長，但對細胞周期的影響取決于細胞種類。(4)磷脂酰絲氨酸外翻法研究結(jié)果顯示，CMT-8可以誘導(dǎo)MDA-MB-231細胞凋亡，并呈濃度依賴關(guān)系。(5)Western blot結(jié)果顯示，CMT-8處理細胞24h后，明顯下調(diào)MCF-7細胞周期相關(guān)蛋白CyclinE和CDK2的表達水平。在MDA-MB-231細胞，

5、則下調(diào)抗凋亡蛋白NF-κB和Bcl-2表達水平，上調(diào)促凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表達水平。在HeLa細胞，周期蛋白CyclinD和CyclinE的表達水平則表現(xiàn)為明顯的下降。(6)采用MTT比色法、克隆形成法及單擊多靶模型擬合曲線的分析結(jié)果表明HeLa細胞經(jīng)過低濃度CMT-8的24h預(yù)處理可以增加HeLa細胞對X-射線的放射敏感性，且這種放射增敏效應(yīng)是隨著CMT-8濃度的提高而增加。(7)流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，CMT-8聯(lián)合X-

6、射線和單純X-射線照射HeLa細胞24h后，均能增加HeLa細胞的G2/M期阻滯，但導(dǎo)致的G2/M期阻滯并無明顯的差異。(8)Western blot結(jié)果顯示與X-射線單獨照射相比，CMT-8聯(lián)合X-射線能明顯下調(diào)DNA損傷修復(fù)蛋白Ku70和DNA-PKcs的表達水平。
　　 結(jié)論:(1)CMT-8有廣譜的抗腫瘤作用，對本課題所研究的幾種不同種類腫瘤細胞都有明顯生長抑制作用，且呈劑量-時間-依賴關(guān)系。(2)CMT-8抑制細胞生長