甲苯磺丁脲等9種CYP探針藥物體內(nèi)肝清除率預(yù)測.pdf

1、多種藥物在個體和種族間的代謝呈現(xiàn)出顯著差異性，對于治療指數(shù)比較窄的藥物，若不能預(yù)估其個體差異，就可能導致嚴重的毒性反應(yīng)，甚至死亡。如果一個藥物在用于臨床之前，其在人群中的安全治療范圍可以預(yù)測，藥物開發(fā)的效率將會得到改善。目前體外體內(nèi)外推法（IVIVE，in vitro-in vivo extrapolation)使研究人員有機會在研究體內(nèi)藥代動力學之前獲得藥物體內(nèi)代謝的定量數(shù)據(jù)。
　　體外體內(nèi)外推法（IVIVE），是用數(shù)學模型由藥

2、物體外性質(zhì)(藥物溶出的速率或程度)或體外藥動學預(yù)測其體內(nèi)特性(血藥濃度或藥物吸收量)或體內(nèi)藥動學的方法。由藥物的體外內(nèi)在清除率 Clint,in vitro預(yù)測體內(nèi)肝清除率（CLh）是 IVIVE的重要研究之一。目前應(yīng)用較多的體外清除率數(shù)據(jù)主要來源于肝微粒、肝細胞、肝切片等。肝微粒體的體外內(nèi)在清除率（Clint,in vitro）是體外數(shù)據(jù)的主要來源之一。
　　隨著研究的不斷深入，IVIVE的研究方法日趨增多，本研究總結(jié)以往的預(yù)測

3、方法，選擇其中應(yīng)用較廣的三種方法（Obach-fup,Rb法、Berezhkovskiy-fup,app,Rb法與Poulin-fuliver,Rb法）預(yù)測9種CYP探針藥物（CYP1A2探針非那西汀、CYP2A6探針-香豆素、CYP2B6探針-安非他酮、CYP2C8探針-紫杉醇、CYP2C9探針-甲苯磺丁脲、CYP2C19探針-奧美拉唑鈉、CYP2D6探針-右美沙芬、CYP2E1探針-氯唑沙宗、CYP3A探針-咪達唑侖）的體內(nèi)肝清除率

4、。并采用平均折合誤差（Average-fold error，afe）評價藥物體內(nèi)肝清除率預(yù)測的準確度，當 afe值在0.5-2.0范圍內(nèi)時預(yù)測準確。
　　本研究還考慮了藥物微粒體蛋白游離率（藥物在微粒體混合體系中的游離率（fum））對預(yù)測準確度 afe的影響，測定了藥物在本實驗室條件下的 fum值。以評價fum對預(yù)測準確度afe的影響。
　　預(yù)測體內(nèi)肝清除率的參數(shù)主要有每克肝微粒體蛋白的含量（MPPGL）、肝臟重量（LW），

5、肝血流量（Qh）和體重（BW）等五個參數(shù)，目前體內(nèi)CLh預(yù)測的研究，普遍采用這些參數(shù)的平均值進行預(yù)測，忽略了參數(shù)個體值的變異，以致無法預(yù)知藥物在體內(nèi)代謝的個體差異。本研究采用五種參數(shù)的個體值，預(yù)測藥物的體內(nèi)肝清除率，考察五種參數(shù)個體值的變異對預(yù)測結(jié)果個體差異的影響。同時，研究還考慮了預(yù)測方法對預(yù)測結(jié)果個體差異的影響。以期，為預(yù)測藥物體內(nèi)肝清除率的個體差異提供依據(jù)，為預(yù)測藥物臨床治療范圍的研究提供參考。
　　方法：
　　1、藥

6、物微粒體蛋白體游離率（fum）的測定
　　測定5種探針藥物的 fum（紫杉醇與咪達唑侖因文獻報道的 fum值，與本實驗室所用的微粒體蛋白濃度一致，研究不再測定）。首先，在空白體系（不含人肝微粒體）中，采用超濾法測定藥物在高中低三個濃度下通過超濾膜的比率；再在不同濃度的微粒體蛋白體系（非那西汀-0.3mg/ml，香豆素-0.3mg/ml，甲苯磺丁脲-0.5mg/ml，奧美拉唑鈉-0.5mg/ml，右美沙芬-0.2mg/ml）中，測定

7、高中低三個濃度的超濾液中游離藥物的濃度；最后，用藥物在空白體系中的通過率校正計算得到混合肝微粒體體系中實際游離藥物的濃度，以計算藥物的fum值。
　　2、數(shù)據(jù)的收集
　　收集本實驗室測定的105例樣本的體外內(nèi)在清除率（Clint，in vitro）、每克肝臟微粒體蛋白的含量（MPPGL）、肝臟重量（LW），肝血流量（Qh），體重（BW）/體表面積（BSA）等五種參數(shù)。
　　3、體內(nèi)肝清除率（CLh）的預(yù)測
　　采

8、用Obach-fup,Rb法、Berezhkovskiy-fup,app,Rb法與Pouli-fuliver,Rb法等三種方法預(yù)測藥物的體內(nèi)肝清除率CLh，評估預(yù)測方法對藥物體內(nèi)CLh預(yù)測準確度的影響；引入藥物的fum值預(yù)測藥物的體內(nèi)肝清除率，評價其對預(yù)測準確度的影響。
　　4、體內(nèi)CLh個體差異的預(yù)測及其影響因素
　　采用Clint in vitro、MPPGL、LW、Qh、BW等五種參數(shù)的個體值預(yù)測藥物的體內(nèi)肝清除率，評

9、價五種參數(shù)個體值的差異對預(yù)測結(jié)果個體差異的影響。采用三種預(yù)測方法預(yù)測藥物體內(nèi)CLh的個體差異，評價預(yù)測方法對預(yù)測準確度的影響。
　　5、預(yù)測準確性（afe）評價
　　預(yù)測的準確性是用平均折合誤差afe（Average-fold error）值評價。兩倍的預(yù)測精密度限制是允許的，對應(yīng)afe值是0.5-2.0。一個方法預(yù)測完全準確的afe值是1。
　　6、統(tǒng)計方法
　　采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對各項數(shù)據(jù)資料進行統(tǒng)

10、計學分析。對于非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，采取非參數(shù)檢驗進行相關(guān)分析。檢驗水準α為0.05，P<0.05認為有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　1、藥物微粒體蛋白游離率
　　1.1、藥物超濾膜的通過率
　　空白體系（不含人肝微粒體）中，香豆素、甲苯磺丁脲在三個濃度的通過率一致，平均通過率分別為88.94％、93.86%、79.4%，計算這三個藥物的fum值時，采用平均通過率進行計算。而右美沙芬在高中低三個濃度的通過率不同，且隨

11、濃度增加通過率與有增加趨勢，分別為94.45%（320μM）、88.40%（40μM）、80.56%（10μM），非那西汀在高中低的游離率分別為：94.44%（400μM）、95.79%（50μM）、86.97（12.5μM）%，與奧美拉唑鈉79.0%（7.832μM）、76.0%（62.5μM）、83.2%（250μM），因此，計算非那西汀、右美沙芬與奧美拉唑鈉fum值時采用其對應(yīng)濃度的通過率。
　　1.2、藥物微粒體蛋白游離率

12、（fum）
　　5種探針藥物分別在其高中低三個濃度所測的fum值，沒有統(tǒng)計學差異，取三個濃度的平均值做為該藥物的微粒體蛋白游離率fum。非那西?。?.3mg/ml）、香豆素（0.3mg/ml）、噢美拉唑鈉（0.5mg/ml）、甲苯磺丁脲（0.5mg/ml）、右美沙芬（0.2mg/ml）在對應(yīng)微粒體蛋白濃度下的fum值分別為：97.22%、94.01%、90.8%、97.66%、93.36%。五種探針藥物在特定的微粒體蛋白濃度體系中

13、的游離率較大，均大于90%。
　　2、預(yù)測的9種CYP探針藥物體內(nèi)CLh
　　2.1、三種方法預(yù)測藥物的體內(nèi)肝清除率
　　9種CYP探針藥物，安非他酮與氯唑沙宗均是口服制劑，沒有靜脈給藥的體內(nèi)清除率數(shù)據(jù)，本研究不做其預(yù)測的準確度評價。其他7種探針藥物采用Obach-fup,Rb法甲苯磺丁脲與咪達唑侖兩個藥物的預(yù)測值在體內(nèi)清除率的2倍范圍內(nèi)(其afe值分別為0.57、2.03)，預(yù)測準確； Berezhkovskiy-f

14、up,app,Rb法的預(yù)測結(jié)果，只有咪達唑侖預(yù)測準確，其afe值為2.03；采用Poulin-fuliver,Rb法預(yù)測，預(yù)測結(jié)果均在2倍范圍之外。三種方法，Obach-fup,Rb法預(yù)測準確度較高。
　　2.2、 fum值對預(yù)測準確度的影響
　　三種方法的預(yù)測準確度方面，咪達唑侖（afe值≥2），當加入fum值預(yù)測時， afe值增大，預(yù)測準確度降低；其他6個藥物（預(yù)測值低于實測值），當加入fum值預(yù)測時， afe增大，預(yù)測

15、準確度增加（甲苯磺丁脲Obach-fup,Rb法雖預(yù)測準確（afe值為0.57），但仍屬偏低預(yù)測）。對于預(yù)測不準確的探針藥物，采用fum值校正后，未達到預(yù)測準確性的要求，即預(yù)測結(jié)果在體內(nèi)觀測值得2倍范圍之外。
　　3、預(yù)測探針藥物體內(nèi)CLh的個體差異范圍
　　3.1、五種參數(shù)對預(yù)測CLh個體差異的影響
　　對于第2部分預(yù)測準確的甲苯磺丁脲與咪達唑侖，兩個藥物的 CLh的個體差異分別為49.7倍、21.3倍，其95%PI

16、的差異分別為25.0倍、5.1倍。五種參數(shù)個體值的差異，對預(yù)測結(jié)果個體差異影響最大的是MPPGL（個體差異分別為：2.5倍與12.5倍）與Clint,in vitro（個體差異范圍為：24.2倍，24.7倍），其次是體重、肝重與肝血流量（個體差異范圍都約在2倍范圍內(nèi)）。其中肝血流量的個體值差異對預(yù)測結(jié)果個體差異影響最小。
　　3.2、預(yù)測方法與fum值對體內(nèi)CLh個體差異的影響
　　同一方法預(yù)測9種CYP探針藥物的體內(nèi)CLh

17、，采用fum值校正后，甲苯磺丁脲與紫杉醇的個體差異沒有變化，其他5種探針藥物預(yù)測結(jié)果的個體差異倍數(shù)均減小。未加入fum值預(yù)測時，不同方法之間，預(yù)測結(jié)果的個體差異也不同，除甲苯磺丁脲外，其余探針藥物體內(nèi)CLh個體差異最大的是Obach-fup,Rb法預(yù)測的，其次是Berezhkovskiy-fupapp,Rb法，CLh個體差異最小的是Poulin-fuliver,Rb法。這個結(jié)果，在加入fum值校正的結(jié)果中，也可以見到。
　　結(jié)論：

18、
　　1.藥物微粒蛋白游離率（fum）較大，藥物體內(nèi)肝清除率預(yù)測準確性不依賴于fum值的校正，但fum值可以改善藥物的預(yù)測準確度。
　　2.三種方法預(yù)測9種探針藥物CLh，Obach-fup,RB法預(yù)測準確度較高，9種CYP探針藥物中甲苯磺丁脲與咪達唑侖預(yù)測準確。
　　3.甲苯磺丁脲與咪達唑侖預(yù)測的體內(nèi)肝清除率CLh個體差異較大（21.3-49.7倍），預(yù)測參數(shù)（Clint in vitro、MPPGL、LW、Qh、B