QO-581ysine鹽大鼠長(zhǎng)期毒性及相伴毒代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、QO-58是新開(kāi)發(fā)的吡唑并嘧啶酮類(lèi)鉀通道開(kāi)放劑，對(duì)鈉通道有抑制作用，藥效學(xué)初步研究提示其有抗驚厥、抗癲癇和鎮(zhèn)痛等作用。QO-58原藥水溶性較差，為提高其溶解性，制成了賴(lài)氨酸鹽即QO-58lysine。為了評(píng)價(jià)QO-58lysine鹽的臨床前安全性，本研究將進(jìn)行其長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)及相伴毒代動(dòng)力學(xué)研究，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)成新藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　第一部分 QO-58lysine鹽大鼠長(zhǎng)期毒性研究
　　目的:觀察連續(xù)灌胃給予SD大鼠QO-5

2、8lysine鹽化合物4周的長(zhǎng)期毒性反應(yīng)，為進(jìn)一步的研發(fā)工作提供參考。
　　方法:SD大鼠80只，6-7周齡，體重180～220g，雌雄各半，試驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)和檢疫1周。試驗(yàn)時(shí)按性別、體重隨機(jī)分成4組，每組20只，雌雄分籠飼養(yǎng)。供試品分成小、中、大三個(gè)劑量組，分別為66、200、600mg/kg，對(duì)照組給予0.5％的CMC-Na溶媒。以上動(dòng)物全部灌胃給藥，灌胃容積為2ml/100g體重，每日給藥1次，每周給藥7天，連續(xù)4周。給藥期

3、間，每日觀察動(dòng)物外觀體征、行為活動(dòng)，每周測(cè)量一次體重、攝食量并計(jì)算攝食量/體重。末次給藥后24h各組剖殺12只動(dòng)物（雌雄各半），觀察各組給藥后血液學(xué)指標(biāo)及血液生化指標(biāo)的變化，并進(jìn)行大體解剖和組織病理學(xué)檢查，對(duì)心臟、肝臟、肺臟、脾臟、腎臟、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、子宮、卵巢、腦等進(jìn)行剝離稱(chēng)重并計(jì)算臟器系數(shù)，停藥恢復(fù)2周后，各組剖殺剩余動(dòng)物，進(jìn)行上述檢查。試驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理和統(tǒng)計(jì)分析采用Excel2003和SPSS13.0軟件。
　　結(jié)

4、果:
　　1、一般觀察:QO-58lysine鹽連續(xù)給藥4周及停藥恢復(fù)2周，動(dòng)物外觀體征、行為活動(dòng)與溶媒對(duì)照組基本一致;給藥4周內(nèi)及停藥2周后，各劑量組體重、攝食量和攝食量/體重與對(duì)照組相比均無(wú)明顯差異。
　　2、血液學(xué)檢查:QO-58lysine鹽小、中、大劑量連續(xù)給藥4周，與對(duì)照組相比，小劑量組單核細(xì)胞百分比(MO％)和凝血酶原時(shí)間(PT)明顯升高(P＜0.05)，紅細(xì)胞平均血紅蛋白(MCH)明顯降低（P＜0.05），停

5、藥2周后，MO％仍偏高(P＜0.05)，其他參數(shù)恢復(fù)正常;中劑量組各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)顯著差異(P＞0.05);大劑量組MO％和PT明顯升高（P＜0.05），恢復(fù)2周中性粒細(xì)胞百分比(NE％)明顯降低(P＜0.05)和血小板計(jì)數(shù)(PLT)明顯增大(P＜0.05)。由于MO的升高有劑量依賴(lài)關(guān)系，提示動(dòng)物可能伴有炎癥反應(yīng)。
　　3、血液生化學(xué)檢查:QO-58lysine鹽小、中、大劑量連續(xù)給藥4周，與對(duì)照組相比，小劑量組總膽紅素(T-BIL)顯

6、著升高(P＜0.01)、白蛋白(ALB)降低(P＜0.05);中劑量組天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、血清鉀離子(K+)濃度、氯離子(Cl-)濃度明顯降低（P＜0.05或0.01），T-BIL、血糖(GLU)明顯升高(P＜0.01，P＜0.05);大劑量組T-BIL明顯升高(P＜0.01)，CK明顯降低(P＜0.05)，其它指標(biāo)無(wú)顯著性改變。停藥2周后，小、中、大三個(gè)劑量組生化指示基本恢復(fù)正常，僅AST、CK有顯著降低

7、(P＜0.05)，這種改變認(rèn)為無(wú)生物學(xué)意義。
　　4、臟器重量及臟器系數(shù):QO-58lysine鹽小、中、大劑量連續(xù)給藥4周后，各劑量組各臟器重量與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異，僅大劑量組雄性動(dòng)物脾臟重量系數(shù)明顯降低(P＜0.05)。停藥2周后，與對(duì)照組相比，小劑量組雌性動(dòng)物腎臟重量明顯減少（P＜0.05），中劑量組雄性動(dòng)物腎上腺重量明顯增加(P＜0.05)，大劑量組雄性動(dòng)物心臟重量明顯增加(P＜0.05)和雌性動(dòng)物脾臟重量明顯增加(P＜

8、0.05);小劑量組雄性動(dòng)物心臟重量系數(shù)明顯減小(P＜0.05)，大劑量組雌性動(dòng)物脾臟重量系數(shù)明顯增高（P＜0.05）。
　　5、病理學(xué)檢查結(jié)果:QO-58lysine鹽小、中、大劑量連續(xù)給藥4周后，對(duì)照組動(dòng)物出現(xiàn)不同程度氣管和肺炎細(xì)胞浸潤(rùn)、脾臟髓外造血，個(gè)別出現(xiàn)肝臟、心臟和腎臟的病變。給藥組大鼠小、中、大三個(gè)劑量組也均出現(xiàn)脾臟髓外造血（58.3％-83.3％），氣管炎細(xì)胞浸潤(rùn)（58.3％-91.7％），肺部支氣管炎性改變(25％

9、-58.3％)，從發(fā)生率和發(fā)生的程度上與對(duì)照比較沒(méi)有明顯差別。停藥2周后，上述病變均已減輕或消失。由于上述改變亦見(jiàn)于對(duì)照組，且無(wú)劑量依賴(lài)關(guān)系，認(rèn)為可能與給藥操作有關(guān)，均非藥物因素所致。
　　結(jié)論:QO-58lysine鹽連續(xù)給藥4周，各組均出現(xiàn)氣管、肺的炎性變化，認(rèn)為可能與灌胃操作有關(guān)，未見(jiàn)明顯的藥源性毒性發(fā)現(xiàn)。但給藥組出現(xiàn)的總膽紅素呈劑量依賴(lài)性升高和心臟重量增大，提示在以后的研究中需要引起注意。
　　第二部分 QO-58l

10、ysine鹽大鼠相伴毒代動(dòng)力學(xué)研究
　　目的:研究SD大鼠單次及多次（4周）灌胃給予QO-58lyine鹽化合物的毒代動(dòng)力學(xué)，分析機(jī)體血藥濃度變化規(guī)律及體內(nèi)蓄積分布情況。
　　方法:
　　1、SD大鼠80只，6-7周齡，體重180～220g，雌雄各半，試驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)和檢疫1周以確保無(wú)異常。試驗(yàn)時(shí)按性別、體重隨機(jī)分成4組，各組均為20只，雌雄分籠飼養(yǎng)。給藥劑量及給藥方式與長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)一致。給藥第一天，每組隨機(jī)取10只大

11、鼠（雌雄各半）做單次毒代動(dòng)力學(xué)，在給藥前(0h)及藥后1h、5h、10h、15h、24h、48h共7個(gè)時(shí)間點(diǎn)采用內(nèi)眥連續(xù)取血。取完最后一個(gè)點(diǎn)的血后剖殺并取主要臟器:心臟、肝臟、肺臟、脾臟、腎臟、胃臟、肌肉、腦、脂肪、膀胱、睪丸和子宮，勻漿后測(cè)各組織中藥物是否仍有分布。剩下的40只大鼠，與長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)同期連續(xù)灌胃給藥4周。末次給藥前(0h)及藥后1h、5h、10h、15h、24h、48h共7個(gè)時(shí)間點(diǎn)采用內(nèi)眥連續(xù)取血。取完最后一個(gè)點(diǎn)的血后剖

12、殺取主要臟器:心臟、肝臟、肺臟、脾臟、腎臟、胃臟、肌肉、腦、脂肪、膀胱、睪丸和子宮，勻漿測(cè)各組織中藥物是否仍有分布。
　　2、采用HPLC-MS/MS法測(cè)QO-58lysine鹽血藥濃度。LC條件:Phenomenex C18色譜柱(50×2.0 mm，3μm)，柱溫為35℃，流動(dòng)相為乙腈-10mM乙酸銨水溶液(53∶47)，流速為0.3mL·min-1，進(jìn)樣量為5μL; MS條件:電噴霧離子源，正離子電離模式，多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)的M

13、S掃描方式。運(yùn)用DAS3.2.6軟件計(jì)算AUC0-48、 Cmax、 Tmax等毒代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　結(jié)果:
　　1、QO-58lysine鹽血藥濃度線(xiàn)性范圍為0.05～250mg/L，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)為Y=135000X-211(r=0.9959)，最低定量限為0.05mg/L;低濃度(0.1 mg/L)的日內(nèi)和日間精密度良好，RSD均小于20％，準(zhǔn)確度在±15％以?xún)?nèi)，中濃度(25 mg/L)和高濃度(250 mg/L)的日內(nèi)和日

14、間精密度RSD均小于15％，準(zhǔn)確度均在±15％以?xún)?nèi);基質(zhì)效應(yīng)和回收率均符合要求;其常溫放置2h、-20℃儲(chǔ)存15日及反復(fù)凍融3次的穩(wěn)定性良好。
　　2、動(dòng)物性別對(duì)藥物峰濃度（Cmax）和藥時(shí)曲線(xiàn)下面積(AUC)無(wú)明顯影響，雌雄差別不明顯。各劑量組AUC與給藥劑量呈線(xiàn)性相關(guān)。多次給藥的Cmax和AUC0-48比單次給藥的低，Tmax與單次給藥相比縮短。48h的組織濃度分布結(jié)果顯示，藥物主要?dú)埩粲诟魏湍I，其它主要臟器停藥48h后未見(jiàn)明