糖尿病大鼠單側迷路切除術后行為學及GLUT3、GLUT4、胰島素受體、APP在前庭核團、海馬和小腦旁絨球分布變化的觀察比較.pdf

1、目的:
　　1.通過對單側迷路切除術后糖尿病大鼠前庭代償中行為學相關指標評分以及糖尿病大鼠前庭肌誘發(fā)電位的結果分析，以期探索糖尿病病程對于前庭神經反射通路和前庭代償建立的影響。
　　2.通過檢測四組（糖尿病組、對照組、糖尿病手術組、對照手術組）前庭核團、海馬、小腦旁絨球葡萄糖轉運蛋白3(Glucose transporter3，GLUT3)和葡萄糖轉運蛋白4(Glucose transporter4，GLUT4)的表達變化;

2、以期從細胞能量代謝的角度探索前庭代償的機制及糖尿病的影響。
　　3.通過原位雜交方法檢測前庭核團區(qū)、小腦旁絨球區(qū)有無胰島素受體-PmRNA和APP mRNA的表達。免疫組化的方法檢測上述相關區(qū)域有無β淀粉樣蛋白的表達，以期探索糖尿病促腦組織老化作用對于前庭中樞部分解剖區(qū)域可能的影響。
　　實驗對象及方法:
　　用鏈脲佐菌素(streptozocin，STZ)造雄性SD大鼠糖尿病模型;手術破壞并氯仿注入內耳造單側迷路切除

3、模型;分別針對不同糖尿病病程大鼠行頸肌前庭誘發(fā)肌源性電位（cervical Vestibular evoked potential，cVEMP）檢測，術后在不同時間點給予失衡癥狀評分。取糖尿病組12周隨機分兩組:假手術組和單側迷路切除組。正常大鼠隨機分兩組對照組和迷路切除組。于術后24小時，取腦組織，依據《大鼠腦立體定位圖譜（3版）》定位切片，選取前庭核團區(qū)域、海馬、小腦旁絨球采用免疫組化和原位雜交的方法檢測葡萄糖轉運蛋白3、葡萄糖轉運

4、蛋白4、免疫組化方法檢測上述區(qū)域β淀粉樣蛋白;通過原位雜交方法檢測上述區(qū)域胰島素受體-PmRNA、APPmRNA。另取飼養(yǎng)18個月的雄性SD大鼠為老年組，同上定位并取相應區(qū)域檢測。
　　結果:
　　1.cVEMP檢測示:隨著成模時間延長，糖尿病組從第8周開始，閾值、P1潛伏期、N1潛伏期與對照組比較具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，表現為閾值升高和潛伏期延長。對照組與糖尿病不同時期組的P1-N1波間振幅不具有統(tǒng)計學差異(P＞0

5、.05)。
　　2.失衡癥狀評分示:糖尿病12周組失衡癥狀評分在術后12小時及以后的各時間點與對照組比較均具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　3.GLUT3、GLUT4免疫組化在前庭核團、海馬、小腦旁絨球糖尿病假手術組、手術組和正常對照組、對照手術組組間比較。
　　GLUT3在前庭核團區(qū)，糖尿病組、糖尿病手術組分別與對照組、正常手術組比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);手術組（糖尿病、正常組）術后左右兩側比較無明顯統(tǒng)

6、計學差異(P＞0.05);糖尿病手術組兩側與正常大鼠術后兩側分別比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);糖尿病手術組與老年大鼠組比較無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05);正常手術組與老年大鼠組比較有顯著統(tǒng)計學差異(p＜0.01)。
　　比較海馬區(qū)GLUT3，糖尿病兩組之間無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05);對照組與正常手術組有明顯統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。糖尿病組與對照組和正常手術組比較均有明顯差異(P＜0.05);糖尿病手術組與對照組和正

7、常手術組比較均有明顯差異(P＜0.05)
　　比較小腦旁絨球GLUT3，糖尿病組與糖尿病手術組比較無顯著差異(P＞0.05);對照組與對照手術組比較有顯著差異(P＜0.05);糖尿病組、糖尿病手術組分別與對照組和對照手術組比較均有顯著差異(P＜0.05)。
　　GLUT4前庭核團區(qū)，上述四組比較有顯著差異(P＜0.05)，根據秩均值大小排列，正常手術組＞糖尿病組＞糖尿病手術組＞對照組。GLUT4海馬區(qū)比較，四組比較有顯著差異

8、(P＜0.05);根據秩均值大小排列正常手術組＞對照組＞糖尿病手術組＞糖尿病組。小腦旁絨球區(qū)比較，四組比較無顯著差異(P＞0.05)。
　　GLUT3前庭核團區(qū)原位雜交上述四組比較有明顯統(tǒng)計學差異(P＜0.05);GLUT3海馬區(qū)原位雜交四組比較無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05); GLUT3絨球區(qū)原位雜交四組比較有明顯統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。GLUT4前庭核團原位雜交四組比較無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05); GLUT4絨球區(qū)

9、原位雜交四組比較無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05); GLUT4海馬區(qū)原位雜交四組比較無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　4.淀粉樣蛋白檢測糖尿病組未發(fā)現陽性表現。APPmRNA原位雜交前庭核團區(qū):四組有顯著差異P＜0.05。根據秩均值大小排列糖尿病組(57.25)＞糖尿病手術組(43.42)＞對照手術組(44.35)＞對照組(32.48)。APP旁絨球區(qū):四組比較有顯著差異(P＜0.05)根據秩均值大小排列糖尿病組27.88＞

10、糖尿病手術組27.20＞對照組10.25＞對照手術組8.90。APP海馬區(qū):糖尿病組與對照組比較兩個獨立樣本T檢驗兩組有顯著差異(P＜0.05)。APP前庭核團區(qū)，糖尿病組與對照組、老年組比較:三組間有明顯統(tǒng)計學差異P＜0.05，根據秩均值大小排列糖尿病組36.32＞老年組29.45＞青年組22.74。線性回歸檢測:前庭肌誘發(fā)電位P1潛伏期與APP具有相關性，與GLUT3、GLUT4無明顯相關;N1潛伏期與APP、GLUT3、GLUT4

11、無明顯相關性，閾值與APP，GLUT3、GLUT4無相關性。
　　5.胰島素受體-P mRNA原位雜交糖尿病組和老年組在前庭核團區(qū)域比較無明顯差異(P＞0.05);糖尿病組和對照組比較在前庭核團區(qū)域有明顯差異(P＜0.05);旁絨球糖尿病組和對照組無明顯差異(P＞0.05)。
　　結論:
　　1.糖尿病病程對cVEMP檢測有影響，體現在刺激閾值升高、P1,N1波潛伏期的延長，而振幅無明顯差異。
　　2.隨著糖尿病

12、病程延長而靜態(tài)代償時間延長。
　　3.單側迷路破壞后，前庭核團、海馬、小腦旁絨球區(qū)葡萄糖轉運蛋白有明顯變化，提示前庭代償期間該區(qū)域功能細胞基礎代謝可能發(fā)生改變。糖尿病對于上述區(qū)域的葡萄糖轉運蛋白3、4含量具有影響，可能降低上述區(qū)域神經元的基礎代謝，從而對維持正常的前庭功能和代償建立起到負面作用。
　　4.前庭核團和旁絨球存在胰島素受體mRNA，上述區(qū)域可能受周圍胰島素變化的影響，并由此發(fā)生相應功能上的改變，糖尿病導致胰島素含