多巴胺Ⅱ型受體阻斷劑硫利達(dá)嗪殺傷人卵巢癌細(xì)胞機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　探討多巴胺二型受體（DR2）阻斷劑硫利達(dá)嗪對人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3，A2780增殖，凋亡及自噬的影響及其可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　將人卵巢癌細(xì)胞SKOV3,A2780按既定時間暴露于不同濃度硫利達(dá)嗪后：CCK8法檢測細(xì)胞增殖情況；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率；DCFH-DA法染色檢測ROS水平；“彗星實(shí)驗(yàn)”觀察細(xì)胞核DNA損傷；免疫熒光檢測自噬相關(guān)蛋白LC-3的表達(dá)定位；Western blot檢測D

2、R2，cleaved caspase-3,Nrf2,p-Nrf2,NQO1,HO-1,HIF-1,VEGF,LC-3，P62，JNK,p-JNK,p38,p-p38,ERK,p-ERK,AKT,p-AKT等蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　硫利達(dá)嗪實(shí)驗(yàn)組DR2表達(dá)下調(diào)，同時人卵巢癌細(xì)胞增殖受到明顯抑制并呈時間-劑量效應(yīng)關(guān)系(p<0.05)；實(shí)驗(yàn)組人卵巢癌細(xì)胞凋亡率高于對照組（P<0.05）且凋亡相關(guān)蛋白cleaved caspa

3、se-3表達(dá)明顯上調(diào)；硫利達(dá)嗪實(shí)驗(yàn)組ROS水平明顯升高（P<0.05），抗氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白p-Nrf2及其下游相關(guān)蛋白如：NQO1, HO-1, HIF-1， VEGF等明顯下調(diào)；實(shí)驗(yàn)組彗星形成率明顯高于對照組（P<0.05）；硫利達(dá)嗪誘導(dǎo)自噬發(fā)生，與對照組相比較，實(shí)驗(yàn)組自噬相關(guān)蛋白LC3-II明顯上調(diào)，P62明顯下調(diào)，且具有一定的時間依賴性及劑量依賴性；用3-MA抑制自噬，實(shí)驗(yàn)組凋亡率增加（P<0.05）；信號通路：P-AKT及P-P

4、38表達(dá)下調(diào)，P-ERK表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論：
　　多巴胺II型受體（DR2）阻斷劑硫利達(dá)嗪抑制人卵巢癌細(xì)胞增殖效應(yīng)可能與DR2表達(dá)抑制相關(guān)。誘導(dǎo)ROS產(chǎn)生,抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)失衡及 DNA損傷可能是硫利達(dá)嗪誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞凋亡發(fā)生的潛在機(jī)制。硫利達(dá)嗪也可能通過ERK/AKT信號通路誘導(dǎo)自噬發(fā)生，抑制自噬后，細(xì)胞凋亡增強(qiáng)，表明自噬在硫利達(dá)嗪發(fā)揮細(xì)胞毒性作用過程中可能起到保護(hù)作用。DR2可能成為卵巢癌治療的新靶點(diǎn)，DR2阻斷劑硫利