非諾貝特和吡格列酮對脂肪甘油三酯脂酶的調(diào)控及機制研究.pdf

1、第一部分非諾貝特和吡格列酮對肥胖大鼠脂肪甘油三酯脂酶表達的影響
　　 目的：脂肪甘油三酯脂酶(Adipose Triglyceride Lipase，ATGL)是水解甘油三酯(Triglyceride，TG)的關(guān)鍵酶。動物實驗證明，改善各組織的脂代謝可以有效增加胰島素的敏感性。然而ATGL在脂肪、肝臟、肌肉三大胰島素作用的靶組織中的調(diào)控尚未闡明。非諾貝特和吡格列酮分別對脂代謝和胰島素敏感性有較強的作用。本研究通過高脂喂養(yǎng)形成肥胖

2、胰島素抵抗大鼠模型，并用非諾貝特和吡格列酮治療肥胖大鼠。
　　 探討：
　　 1.高脂喂養(yǎng)大鼠脂肪、肝臟、肌肉三大組織中TG的變化，以及ATGL在這三大代謝組織中的變化。
　　 2.非諾貝特和吡格列酮治療肥胖大鼠后脂肪、肝臟、肌肉三大組織中TG的變化，以及這三大代謝組織ATGL的表達的調(diào)控作用。
　　 材料與方法：
　　 32只雄性SD大鼠隨機分為2組，普食對照組(NC)和高脂飲食組(HFD)。喂

3、養(yǎng)8周后，HFD組再隨機分為高脂對照組(HFD-UT)、非諾貝特治療組(HFD-FT)、吡格列酮治療組(HFD-PT)，每組8只大鼠，治療4周。在實驗結(jié)束后行口服糖耐量試驗(OGTT)和胰島素耐量試驗(ITT)檢測大鼠糖耐量和胰島素敏感性，取空腹血清檢測血糖、肝功能、血脂和胰島素等。實驗結(jié)束后，處死大鼠，取脂肪、肝臟稱重，計算脂體比和肝體比；庚烷-異丙醇-吐溫抽提法檢測脂肪、肝臟、肌肉組織中TG的含量；Western blot方法檢測脂

4、肪、肝臟和肌肉組織ATGL蛋白的表達水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.HFD-UT組大鼠糖耐量受損，出現(xiàn)胰島素抵抗。
　　 2.HFD-UT組大鼠血脂紊亂，脂體比增加，脂肪、肝臟、肌肉組織中的TG含量均明顯增加(P<0.01)。
　　 3.HFD-UT組大鼠脂肪、肝臟和肌肉組織中ATGL分別較NC組降低50％、70％、40％，均顯著低于NC組。
　　 4.HFD-FT組和HFD-PT組大鼠胰島素抵抗

5、和糖耐量較HFD-UT組改善。
　　 5.HFD-FT組和HFD-PT組大鼠脂體比、肝體比均明顯下降(P<0.01)；HFD-FT組脂肪、肝臟、肌肉中TG的含量分別較HFD-UT組下降了45％、38％、59％；HFD-PT組脂肪、肝臟、肌肉中TG的含量分別較HFD-UT組下降了55％、31％、48％。
　　 6.大鼠脂肪、肝臟、肌肉ATGL蛋白在HFD-FT組較HFD-UT組分別增高40％、40％、1倍；HFD-PT組A

6、TGL表達在脂肪、肝臟、肌肉分別上升90％、50％、40％，但HFD-FT和HFD-PT組ATGL水平較NC組無顯著差異。
　　 小結(jié)：
　　 1.高脂飲食誘發(fā)大鼠糖耐量異常和胰島素抵抗。
　　 2.肥胖大鼠脂肪組織增多，肝臟、肌肉組織出現(xiàn)脂肪沉積，同時組織中ATGL的表達下降。
　　 3.非諾貝特和吡格列酮改善肥胖大鼠的胰島素抵抗。
　　 4.非諾貝特和吡格列酮降低脂肪含量，減輕肝臟、肌肉TG的

7、蓄積，改善ATGL在脂肪、肝臟、肌肉組織的表達。
　　 第二部分非諾貝特和吡格列酮對HepG2和C2C12細胞脂肪甘油三酯脂酶表達的影響
　　 目的：
　　 觀察棕櫚酸對HepG2和C2C12細胞中ATGL表達的影響，并探討非諾貝特和吡格列酮對ATGL的調(diào)控作用。
　　 材料與方法：
　　 HepG2、C2C12細胞在含有10％FBS和1％P/S的DMEM培養(yǎng)液，37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)，取對

8、數(shù)生長期細胞用于實驗。C2C12細胞分化為成熟肌細胞。根據(jù)不同處理方法設(shè)立對照組(CON)、棕櫚酸(PA)處理組、非諾貝特+棕櫚酸(Feno+PA)處理組、吡格列酮+棕櫚酸(Piog+PA)處理組，處理24小時后收集細胞，RT-PCR和western blot方法檢測HepG2、C2C12細胞ATGL蛋白或ATGL mRNA的表達，比較4組細胞中ATGL表達的差異。
　　 結(jié)果：
　　 PA處理后，HepG2、C2C12

9、細胞中ATGL蛋白的表達分別是CON組的40％、60％，C2C12細胞中ATGL mRNA的表達下降了60％，下降有統(tǒng)計學(xué)意義。HepG2細胞中Feno+PA和Piog+PA組ATGL的表達較PA組分別增加了1.2倍、70％；在C2C12細胞，F(xiàn)eno+PA和Piog+PA組ATGL的蛋白表達較PA組分別增加了1倍、80％，ATGL mRNA表達分別上升了90％、30％。
　　 小結(jié)：
　　 棕櫚酸抑制HepG2和C2C

10、12細胞ATGL的表達；非諾貝特或吡格列酮逆轉(zhuǎn)棕櫚酸對ATGL的抑制作用。
　　 第三部分 APPL1介導(dǎo)棕櫚酸對脂肪甘油三酯脂酶的調(diào)控
　　 目的：
　　 APPL1是參與脂肪酸氧化的重要信號分子，其對TG水解的作用目前還不清楚。本實驗通過在C2C12細胞中抑制APPL1的表達，觀察APPL1是否參與棕櫚酸對ATGL的調(diào)控過程。
　　 材料與方法：
　　 1.構(gòu)建APPL1 siRNA質(zhì)粒，建立

11、穩(wěn)定的APPL1-suppressed C2C12細胞。
　　 2.在含有10％FBS的DMEM培養(yǎng)液、37℃、5％C02條件下培養(yǎng)，并將C2C12細胞分化為成熟肌細胞。
　　 3.分別用棕櫚酸(PA)、非諾貝特和棕櫚酸(Feno+PA)、吡格列酮和棕櫚酸(Piog+PA)處理2種細胞，設(shè)立對照組(CON)，24小時后收集細胞。
　　 4.RT-PCR和western blot方法檢測APPL1-suppress

12、ed C2C12和Scrambledcontrol C2C12細胞中ATGL的表達水平。
　　 結(jié)果：
　　 Scrambled control C2C12細胞中，PA組ATGL蛋白和ATGLmRNA的表達均較CON組明顯下降(P<0.01)，F(xiàn)eno+PA和Piog+PA組ATGL蛋白和ATGLmRNA的表達又較PA組明顯上升(P<0.01或P<0.05)；APPL1-suppressedC2C12細胞中4組處理組中A

13、TGL的表達變化無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 小結(jié)：
　　 APPL1介導(dǎo)了棕櫚酸對ATGL表達的下調(diào)作用。
　　 結(jié)論：
　　 1.肥胖大鼠脂肪增多，TG在肝臟、肌肉異位沉積，脂肪、肝臟、肌肉ATGL表達下降。
　　 2.棕櫚酸抑制HepG2、C2C12細胞中ATGL的表達。
　　 3.非諾貝特和吡格列酮改善肥胖大鼠肝臟、肌肉的脂質(zhì)沉積，并改善ATGL在脂肪、肝臟、肌肉中的表達。