肺臟基質(zhì)細(xì)胞分泌的VEGF對權(quán)突狀細(xì)胞分化發(fā)育的影響.pdf

1、樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DC)不僅是最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞(antigenpresenting cells,APC),而且其本身還具有調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)強(qiáng)度、誘導(dǎo)免疫耐受的作用。機(jī)體是一個(gè)有機(jī)復(fù)雜的系統(tǒng),各組分在各層面上相互作用共同維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài),免疫系統(tǒng)亦是如此。研究證實(shí)在脾臟、肝臟微環(huán)境都可誘導(dǎo)DC及造血前體細(xì)胞(hematopoietic stem cells,HSC)進(jìn)一步增殖分化為具有免疫負(fù)向調(diào)控功能的調(diào)節(jié)性樹

2、突狀細(xì)胞(regulatoryDC,Dcreg),并對其微環(huán)境中的各細(xì)胞、趨化因子對DC的影響機(jī)制做了闡述。我們前期研究發(fā)現(xiàn),成熟樹突狀細(xì)胞(mature dendritic cells,mDC)在肺臟基質(zhì)微環(huán)境中可被誘導(dǎo)分化發(fā)育為特殊表型的Dcreg,且具有較弱的激活T細(xì)胞的能力,一定程度上可以降低免疫反應(yīng)強(qiáng)度誘導(dǎo)免疫耐受,但是Dcreg的具體誘導(dǎo)機(jī)制尚未明確。肺臟基質(zhì)微環(huán)境由多種功能性支架細(xì)胞、趨化因子與細(xì)胞因子(VEGF,TGF-

3、β,GM-CSF和PGE2等)等組成,它們是協(xié)調(diào)肺臟局部產(chǎn)生先天性免疫應(yīng)答和獲得性免疫應(yīng)答的主要信息傳遞者,具有極其廣泛的生物學(xué)活性;那么肺臟基質(zhì)微環(huán)境的各細(xì)胞因子在Dcreg的誘導(dǎo)分化過程中發(fā)揮了怎樣的作用呢?在本項(xiàng)研究中,我們通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)作為肺臟基質(zhì)微環(huán)境中重要的細(xì)胞因子-血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)通過影響樹突狀細(xì)胞的表型CD86與NO的分泌表達(dá)參與了肺臟基質(zhì)微

4、環(huán)境對免疫細(xì)胞的誘導(dǎo)分化過程與肺臟免疫穩(wěn)態(tài)維持。
　　 研究目的:
　　 建立穩(wěn)定的小鼠肺臟基質(zhì)細(xì)胞系(murine pulmonary stmoral cells,MPSC),觀察小鼠肺臟基質(zhì)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子VEGF對成熟樹突狀細(xì)胞(mature dendritic cells,mDC)分化發(fā)育影響,并進(jìn)一步探討其對樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)免疫耐受的影響。
　　 方法:
　　 通過小鼠肺臟組織細(xì)胞的原代培養(yǎng)建立

5、穩(wěn)定的成纖維樣基質(zhì)細(xì)胞系,并從細(xì)胞形態(tài)及特異性蛋白表達(dá)兩方面給予鑒定,結(jié)論為原代培養(yǎng)的肺臟基質(zhì)細(xì)胞具備成纖維樣細(xì)胞的特點(diǎn),可以模擬肺臟局部微環(huán)境;采用RT-PCR方法檢測肺臟成纖維樣基質(zhì)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子:血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β),粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(gran

6、ulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor,GM-CSF),白介素10(IL-10)的表達(dá)水平。建立肺臟基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)上清液/樹突狀細(xì)胞(細(xì)胞濃度2×106)共培養(yǎng)體系作為對照組,向體系中加入含有濃度為(5μg/ml)的VEGF中和性抗體作為試驗(yàn)組,各自細(xì)胞培養(yǎng)一周。通過特異性夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測兩組細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子(IL-10和IL-12p70)的含量,流式細(xì)胞術(shù)檢測DC細(xì)胞表

7、型(CD86,CD11c,Ia)表達(dá)水平,Griess試劑檢測體系中NO的分泌量,CCK-8法檢測樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)同種異體T細(xì)胞的增殖能力,兩組結(jié)果進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果:
　　 VEGF中和抗體添加組誘導(dǎo)的DC與未添加抗體組Dcreg相比較其表面細(xì)胞因子IL-10、IL-12p70表達(dá)差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),同樣兩組細(xì)胞誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖率無明顯差別(P＞0.05);VEGF中和抗體添加組誘導(dǎo)的DC其細(xì)胞表型CD

8、86表達(dá)與未添加抗體組Dcreg相比明顯上調(diào)(P＜0.05),而NO的表達(dá)卻明顯低于未添加抗體組Dcreg(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 我們通過細(xì)胞原代培養(yǎng)的的方法建立了穩(wěn)定的肺臟基質(zhì)細(xì)胞系;證明成熟樹突狀細(xì)胞并非終末細(xì)胞,它可以在肺臟基質(zhì)微環(huán)境中分化發(fā)育DC新亞群-調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞(Dcreg);肺臟基質(zhì)細(xì)胞分泌的VEGF通過下調(diào)細(xì)胞表面共刺激分子CD86的表達(dá)與調(diào)節(jié)NO的分泌水平參與了Dcreg誘導(dǎo)免疫耐受