呼吸道合胞病毒感染動物模型的建立及應(yīng)用.pdf

1、人呼吸道合胞病毒（Human Respiratory SyncytiaVirus，hRSV）是全球范圍內(nèi)引起下呼吸道感染主要病原體之一。其感染人群年齡分布廣，新生兒與老年人是主要高危人群。據(jù)報道，幾乎所有小于2周歲嬰幼兒都有RSV感染經(jīng)歷，嬰幼兒發(fā)病住院率高達2.5-4％。RSV引起大于65周歲的老年人感染率為3-4％，病死率約為2％。早產(chǎn)兒、先天性心臟病、先天性支氣管及肺發(fā)育不良、免疫缺陷的嬰幼兒RSV病死率率高達5％，造成嚴重的醫(yī)療

2、負擔。
　　RSV無安全、有效疫苗上市，唯一獲準上市的預(yù)防性RSV藥物為中和性單抗palivizumab(Synagis(@))，特異性識別RSV融合蛋白。Synagis在動物體內(nèi)預(yù)防性試驗的成功提示RSV感染動物模型的建立有助于疫苗、抗體藥物的保護性研究。RSV感染動物模型種類繁多，如小鼠、棉鼠、雪貂、猩猩等，每種動物都有其感染特征。其中，小鼠模型由于易獲得近交系及研究用檢測試劑等，最常用于RSV感染研究，又以BALB/c小鼠應(yīng)

3、用最廣;裸鼠適應(yīng)性免疫系統(tǒng)缺陷，感染后鼻、肺內(nèi)病毒清除延遲，因此可研究先天免疫介導RSV引起的氣道炎癥應(yīng)答，模擬免疫缺陷人群RSV感染。
　　本研究建立不同周齡BALB/c小鼠及裸鼠模型，模擬不同易感人群RSV感染后癥狀，運用該模型對RSV特異性抗體進行體內(nèi)預(yù)防性評估，為RSV藥物的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。首先，本論文分別選取10周齡、30周齡、60周齡BALB/c小鼠，分別感染100μL的107PFU/mL、108PFU/mL滴度的RSV

4、后比較其臨床癥狀及病理變化。結(jié)果顯示，感染108 PFU/mL滴度的RSV感染后不同周齡小鼠都有明顯的體重下降;鼻、肺檢測到較高滴度病毒;免疫組織化學檢測抗原定位于肺泡、支氣管周圍的炎癥細胞胞漿;引起明顯的炎癥細胞浸潤、肺組織病理損傷;隨著小鼠周齡的增大，RSV感染后引起的臨床癥狀及病理變化越嚴重。進一步感染10周齡裸鼠，旨在模擬免疫缺陷RSV感染癥狀，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與BALB/c小鼠相比，RSV并不能使裸鼠體重下降，但裸鼠鼻、肺內(nèi)病毒滴度高

5、、持續(xù)時間久;而裸鼠肺炎癥反應(yīng)出現(xiàn)較BALB/c早，感染后第3天即出現(xiàn)明顯的炎癥反應(yīng)，第7天后炎癥逐漸減輕、恢復;抗原定位在肺泡、支氣管周圍，以第3天最為明顯，第12天鮮見有陽性鐵銹色反應(yīng)。說明適應(yīng)性免疫缺陷裸鼠可利用天然免疫獨立介導RSV感染引起的小鼠氣道炎癥。利用上述已建立好的不同周齡BALB/c小鼠模型，以1129（Synagis的鼠源性抗體）作為對照抗體，對實驗室篩選的一株特異性針對RSV-F蛋白的強中和抗體5C4進行小鼠體內(nèi)預(yù)

6、防性評估，結(jié)果顯示，5C4與1129都能有效減輕RSV引起的體重下降;降低鼻、肺內(nèi)病毒滴度;及肺部炎癥反應(yīng)炎癥。而5C4在低劑量與1129高劑量條件下對小鼠預(yù)防性效果一致;上述現(xiàn)象在不同周齡鼠呈現(xiàn)一致，說明5C4抗體在不同周齡BALB/c小鼠上都有良好的預(yù)防性效果，其有效劑量為1129抗體的1/10，因此可作為RSV預(yù)防性藥物潛在開發(fā)對象。
　　綜上所述本論文建立不同周齡BALB/c小鼠、裸鼠感染動物模型，模擬不同人群RSV感染臨