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文檔簡介
1、研究背景及目的:近年來,過敏性疾病的發(fā)生率越來越高,引起了西方國家乃至全球的關注,過敏性疾病對人類健康所造成的影響已成為一個全球性普遍關注的問題?,F(xiàn)如今我國有1.3億人正在飽受過敏性疾病的困擾,而全球人群發(fā)病率也呈逐年增高趨勢,嚴重地影響了人們的生活質量。而對于此類疾病的治療,目前只是通過控制患者的一些過敏性癥狀,而不能徹底治愈。目前我們所使用的抗過敏治療大都是以降低血清中的游離血清中游離的免疫球蛋白E(IgE)的含量為主,如奧馬珠單抗
2、治療過敏性疾病,通過與游離IgE結合而顯著降低游離IgE水平,阻斷IgE與肥大細胞、嗜酸粒細胞結合,從而抑制肥大細胞和嗜酸粒細胞的活化,減少和防止炎癥介質的釋放。在過敏性疾病中,免疫球蛋白E(immunoglobulin E, IgE)主要介導了I型過敏反應。我們所使用的治療并不能從源頭降低免疫球蛋白E(IgE)的產生。因此,了解IgE產生的信號通路可能能為過敏性疾病的治療提供新的靶點和思路。過去的研究表明,IL-4和CD40在IgE的
3、產生過程中必不可少。有研究指出,在過敏性患者的外周血單核細胞中(PBMc)中,IgE產生的信號調節(jié)與NF-κB和STAT6信號通路有關,但是研究B細胞株中IgE產生的信號通路調節(jié)罕見報導。因此,本研究在此基礎上,采用兩種特異性的信號通路的抑制劑,了解在B細胞株U266細胞株中免疫球蛋白E(IgE)產生的信號通路調節(jié),為疾病的治療提供新的思路和方向。
方法:采用不同濃度的白介素4(IL-4)或不同濃度的抗CD40抗體(CD40)
4、誘導B細胞株,使用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定免疫球蛋白E(IgE)的濃度變化,以及采用q-RTPCR的方法檢測誘導的IgE的重鏈基因(εGLT)的變化,選擇最合適的誘導濃度;采用CCK8細胞增殖、毒性檢測的實驗方法,檢測不同濃度的兩種抑制劑對細胞活力的影響;選取合適的抑制劑濃度,并使用STAT6特異性抑制劑(A177-1726)和NF-κB特異性的抑制劑(JSH-23)抑制這兩條信號通路,檢測上清中免疫球蛋白E(IgE)和Ig
5、E的重鏈基因(εGLT),以及某些相關蛋白的變化。
結果:(1)不同濃度的IL-4或CD40均可以誘導B細胞株產生免疫球蛋白E(IgE)以及能夠觀察到IgE重鏈基因的表達變化;
?。?)使用NF-KB特異性抑制劑JSH-23抑制通路,可以明顯觀察到免疫球蛋白E表達水平的降低,以及IgE重鏈基因表達的變化;
(3)同樣地,使用STAT6特異性抑制劑,免疫球蛋白E的濃度以及重鏈基因的表達均降低,以及其相關蛋白的表
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