腺相關(guān)病毒介導肝臟特異性表達凝血因子IX基因治療血友病B.pdf

1、第一部分腺相關(guān)病毒介導肝臟特異性表達凝血因子 IX基因治療血友病B
　　血友病B（Hemophilia B），又稱乙型血友病，是一種由凝血因子IX基因缺陷而引起的X連鎖隱性遺傳的出血性疾病。臨床治療主要依賴于反復輸注血漿或重組凝血因子IX，這種替代療法雖然有效但是費用昂貴且有感染的風險。近年來國內(nèi)外研究者在基因治療臨床應用研究方面取得了較大的進展，給血友病B患者帶來長期緩解并治愈的希望。腺相關(guān)病毒作為單鏈線狀DNA復制缺陷病毒，具

2、有安全性高、免疫原性低、能介導基因在動物體內(nèi)長期穩(wěn)定表達。因此在血友病B基因治療方面，腺相關(guān)病毒載體(AAV)是目前最有前景的載體。
　　本項研究以當前AAV載體介導血友病B基因治療進展為基礎(chǔ)，先后構(gòu)建優(yōu)化了多種凝血因子IX表達框架來提高蛋白表達量及其凝血活性，包括對因子IX cDNA序列進行密碼子優(yōu)化，引進功能獲得性R338L點突變和篩選肝臟特異性調(diào)控元件。其中候選調(diào)控元件有白蛋白啟動子、前白蛋白啟動子和α1抗胰蛋白酶啟動子。我

3、們選用血友病B小鼠作為主要模型展開研究，以尾靜脈高壓注射的方式導入目的基因，通過檢測小鼠肝臟細胞特異性表達的因子IX水平及其凝血活性，從而篩選評估出最佳表達框架，用于合成基因治療所需病毒載體。
　　綜上所述，與已發(fā)表臨床試驗中取得一定療效的因子IX表達框架相比，我們的優(yōu)化策略可以使因子IX表達水平提高2～3倍，而R338L點突變的引入可使其凝血活性提高6～8倍。這些研究成果為進一步合成基因治療所需病毒載體提供了堅實的理論和實踐基礎(chǔ)

4、，有望為中國血友病B患者提供一項終身有效的一次性治療手段。
　　第二部分砷劑聯(lián)合吉非替尼治療非小細胞肺癌
　　肺癌是發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤之一，按組織學分類分為小細胞肺癌（SCLC）和非小細胞肺癌(NSCLC)，其中小細胞肺癌占15％，非小細胞肺癌占85%。全世界每年約有160粒肺癌新增病例，且每年有140萬死于該病。如今肺癌的治療方法主要有手術(shù)治療，化療和放療。近些年人們在腫瘤發(fā)生機制研究中發(fā)現(xiàn)異?；罨氖荏w/蛋白酪

5、氨酸激酶（RTK/PTK）在腫瘤的發(fā)生及進展中起重要作用。因此通過研究酪氨酸激酶抑制劑(TKI)發(fā)現(xiàn)可以通過一直異常激活的酪氨酸激酶活性而抑制腫瘤的惡化，迅速成為治療相關(guān)腫瘤的藥物。臨床數(shù)據(jù)顯示，東方女性、非吸煙、非小細胞肺癌患者對酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼敏感，但是在用藥12～15個月后會出現(xiàn)耐藥和復發(fā)導致治療失敗。實際上，肺癌的五年總生存率不到15%。因此需要尋找新的治療NSCLC的方案和策略。
　　在本研究中，采用中國傳統(tǒng)藥物

6、三氧化二砷聯(lián)合吉非替尼的策略，探索新的治療非小細胞肺癌有效的治療方案，我們選用三種非小細胞肺癌進行體外細胞試驗，結(jié)果顯示，三氧化二砷對耐藥型非小細胞肺癌細胞株具有增殖抑制作用，且可以誘導肺癌細胞凋亡，聯(lián)合三氧化二砷和吉非替尼效果更加顯著。體內(nèi)試驗也發(fā)現(xiàn)，三氧化二砷可以有效抑制裸鼠皮下成瘤模型中腫瘤的生長速度，當與吉非替尼聯(lián)合使用時，效果更加顯著。
　　綜上所述，我們對三氧化二砷聯(lián)合吉非替尼治療非小細胞肺癌的研究中發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥可以促