腺相關(guān)病毒介導(dǎo)肝臟特異性表達(dá)凝血因子IX基因治療血友病B.pdf

1、第一部分腺相關(guān)病毒介導(dǎo)肝臟特異性表達(dá)凝血因子 IX基因治療血友病B
　　血友病B（Hemophilia B），又稱乙型血友病，是一種由凝血因子IX基因缺陷而引起的X連鎖隱性遺傳的出血性疾病。臨床治療主要依賴于反復(fù)輸注血漿或重組凝血因子IX，這種替代療法雖然有效但是費(fèi)用昂貴且有感染的風(fēng)險(xiǎn)。近年來國內(nèi)外研究者在基因治療臨床應(yīng)用研究方面取得了較大的進(jìn)展，給血友病B患者帶來長期緩解并治愈的希望。腺相關(guān)病毒作為單鏈線狀DNA復(fù)制缺陷病毒，具

2、有安全性高、免疫原性低、能介導(dǎo)基因在動(dòng)物體內(nèi)長期穩(wěn)定表達(dá)。因此在血友病B基因治療方面，腺相關(guān)病毒載體(AAV)是目前最有前景的載體。
　　本項(xiàng)研究以當(dāng)前AAV載體介導(dǎo)血友病B基因治療進(jìn)展為基礎(chǔ)，先后構(gòu)建優(yōu)化了多種凝血因子IX表達(dá)框架來提高蛋白表達(dá)量及其凝血活性，包括對因子IX cDNA序列進(jìn)行密碼子優(yōu)化，引進(jìn)功能獲得性R338L點(diǎn)突變和篩選肝臟特異性調(diào)控元件。其中候選調(diào)控元件有白蛋白啟動(dòng)子、前白蛋白啟動(dòng)子和α1抗胰蛋白酶啟動(dòng)子。我

3、們選用血友病B小鼠作為主要模型展開研究，以尾靜脈高壓注射的方式導(dǎo)入目的基因，通過檢測小鼠肝臟細(xì)胞特異性表達(dá)的因子IX水平及其凝血活性，從而篩選評估出最佳表達(dá)框架，用于合成基因治療所需病毒載體。
　　綜上所述，與已發(fā)表臨床試驗(yàn)中取得一定療效的因子IX表達(dá)框架相比，我們的優(yōu)化策略可以使因子IX表達(dá)水平提高2～3倍，而R338L點(diǎn)突變的引入可使其凝血活性提高6～8倍。這些研究成果為進(jìn)一步合成基因治療所需病毒載體提供了堅(jiān)實(shí)的理論和實(shí)踐基礎(chǔ)

4、，有望為中國血友病B患者提供一項(xiàng)終身有效的一次性治療手段。
　　第二部分砷劑聯(lián)合吉非替尼治療非小細(xì)胞肺癌
　　肺癌是發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤之一，按組織學(xué)分類分為小細(xì)胞肺癌（SCLC）和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，其中小細(xì)胞肺癌占15％，非小細(xì)胞肺癌占85%。全世界每年約有160粒肺癌新增病例，且每年有140萬死于該病。如今肺癌的治療方法主要有手術(shù)治療，化療和放療。近些年人們在腫瘤發(fā)生機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)異?；罨氖荏w/蛋白酪

5、氨酸激酶（RTK/PTK）在腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展中起重要作用。因此通過研究酪氨酸激酶抑制劑(TKI)發(fā)現(xiàn)可以通過一直異常激活的酪氨酸激酶活性而抑制腫瘤的惡化，迅速成為治療相關(guān)腫瘤的藥物。臨床數(shù)據(jù)顯示，東方女性、非吸煙、非小細(xì)胞肺癌患者對酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼敏感，但是在用藥12～15個(gè)月后會(huì)出現(xiàn)耐藥和復(fù)發(fā)導(dǎo)致治療失敗。實(shí)際上，肺癌的五年總生存率不到15%。因此需要尋找新的治療NSCLC的方案和策略。
　　在本研究中，采用中國傳統(tǒng)藥物

6、三氧化二砷聯(lián)合吉非替尼的策略，探索新的治療非小細(xì)胞肺癌有效的治療方案，我們選用三種非小細(xì)胞肺癌進(jìn)行體外細(xì)胞試驗(yàn)，結(jié)果顯示，三氧化二砷對耐藥型非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株具有增殖抑制作用，且可以誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡，聯(lián)合三氧化二砷和吉非替尼效果更加顯著。體內(nèi)試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，三氧化二砷可以有效抑制裸鼠皮下成瘤模型中腫瘤的生長速度，當(dāng)與吉非替尼聯(lián)合使用時(shí)，效果更加顯著。
　　綜上所述，我們對三氧化二砷聯(lián)合吉非替尼治療非小細(xì)胞肺癌的研究中發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥可以促