重組腺相關(guān)病毒-人凝血因子IX基因在人造血干-祖細胞中表達的研究.pdf

1、基因治療在理論上能治愈遺傳性疾病.血友病B是一種凝血因子IX(hFIX)基因缺陷引起的單基因出血性疾病.hFIX的表達不需要精確地調(diào)控,少量提高即可改善患者的出血癥狀,已證實有許多細胞能分泌具有生物學活性的hFIX,因此許多學者選擇它作為基因治療的首選疾病,開發(fā)了各種載體用于血友病B的基因治療.基因治療的關(guān)鍵在于載體.最為常用的是逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(RV),盡管RV具有高效轉(zhuǎn)移、能整合的優(yōu)點,但它不能感染非分裂細胞,且隨機整合有可能引起插入

2、突變,使人們對它的安全性心存顧慮.重組腺相關(guān)病毒(rAAV)具有安全性好、宿主范圍廣,轉(zhuǎn)導效率較高,長期穩(wěn)定表達,可轉(zhuǎn)導分裂細胞和非分裂細胞的特點,成為基因治療的熱點.中國病毒基因工程國家重點試驗室制備和純化的高滴度rAAV-2/hFIX,已在骨骼肌細胞等多種細胞獲得較高表達,成為該實驗選用的載體.靶細胞的選擇對hFIX的表達極其重要.自從Koeberl第一次在動物實驗中證實rAAV可介導hFIX在肝臟中表達,人們采用各種靶細胞如肝細胞

3、、成纖維細胞、骨骼肌細胞等進行了一系列實驗研究,但這些終末分化細胞存在著分泌量低,表達不穩(wěn)定,需要反復治療及有創(chuàng)性治療對血友病患者不利等缺點.造血干/祖細胞(HSPC)具有自我復制、定向分化和強大的擴增潛能,分泌的hFIX直接入血,而且體外培養(yǎng)與移植技術(shù)成熟,是基因治療理想的靶細胞.如果能將rAAV載體和HSPC的優(yōu)勢結(jié)合起來,將hFIX通過rAAV成功地轉(zhuǎn)導入HSPC,隨之表達于各系子代細胞中,有望得到安全的、穩(wěn)定的、方便的一次性治療