重組腺相關病毒2-人凝血因子IX無創(chuàng)途徑給藥治療血友病B的研究.pdf

1、血友病B是由于凝血因子IX(FIX)缺陷引起的X連鎖遺傳出血性疾病?；蛑委熓侵斡渥罾硐敕椒?。然而，血友病B現(xiàn)有的基因治療途徑都是有創(chuàng)的。為了達到無創(chuàng)給藥的目的，我們曾設想以結腸上皮細胞為靶細胞，通過灌腸方法進行血友病B的基因治療。在前期研究中，我們發(fā)現(xiàn)rAAV2/hFIX體外轉(zhuǎn)染腸上皮細胞能夠表達具有凝血活性的hFIX。為了進一步探討通過灌腸給藥后rAAV2/hFIX能否在體內(nèi)表達以及能否表達具有凝血活性的hFIX，本研究首先將rA

2、AV2/hFIx按1×10<'13>vg/kg的劑量結腸灌注給正常昆明小鼠并分析hFIX的表達。在此基礎上，又從基因、蛋白等水平分析了結腸灌注rAAV2/hFIX血友病B小鼠體內(nèi)hFIX的表達，hFIX的凝血活性以及出血表現(xiàn)的變化。 實驗顯示rAAV2/hFIX結腸灌注正常昆明小鼠(n=16)后第7天，血漿和腸液中均可以檢測到hFIX抗原，并在第21天達到高峰，第35天后基本消失。rAAV2/hFIX結腸灌注血友病B小鼠后第21

3、天，PCR擴增結腸組織DNA及其產(chǎn)物DNA序列測定結果顯示，結腸組織中含有hFIX基因。免疫組化結果示hFIX基因表達的部位位于結腸粘膜組織。同時，結腸灌注rAAV2/hFIX后第14天和第21天，在血友病B小鼠(n=4)血漿中可檢測到hFIX抗原。第21天，結腸灌注rAAV2/hFIX的血友病B小鼠血漿中hFIX的活性為(23.54±2.87)％，APTT為(85.1±1.7)s，而結腸灌注生理鹽水的血友病B小鼠的hFIX活性為(8.