hNIS基因組織特異性表達介導肝癌核素顯像與治療.pdf

1、目的：本研究旨在探索鼠白蛋白基因啟動子/增強子(mAlb)調(diào)控下人鈉/碘同向轉運體(hNIS)基因的組織特異性表達介導肝癌核素顯像和治療的可行性,為NIS基因作為新型報告基因和治療基因在基因治療領域的應用提供實驗依據(jù)。方法： 1、質粒構建。采用經(jīng)典分子克隆技術構建mAlb調(diào)控下螢蟲素酶表達載體pmAlb-Luc和mAlb引導下hNIS/潮酶素(hyg)基因共表達的重組逆轉錄病毒載體pSIRmAlbhNISIVSIREShyg。2、瞬時轉

2、染與熒光檢測。脂質體法將pmAlb-Luc轉染鼠肝癌細胞(MH3924A)、人未分化型甲狀腺癌細胞(SW1736)、人乳腺癌細胞(MCF-7)和人大細胞肺癌細胞(LCLC-103H)后24小時檢測螢蟲素酶活性以評價mAlb的功能和組織特異性。3、穩(wěn)定轉染。脂質體法將pSIRmAlbhNISIVSIREShyg轉染包裝細胞EcoPake293,獲取重組逆轉錄病毒顆粒感染鼠肝癌細胞(MH3924A),潮霉素篩選3周后建立NIS穩(wěn)定表達細胞系

3、。4、體外核素攝取和流出實驗。體外培養(yǎng)條件下,評價重組肝癌細胞對125I或99mTc的攝取和流出情況及各種抑制劑對攝取和流出過程的影響。5、克隆形成實驗。不同放射性濃度的131I作用下,計數(shù)克隆形成數(shù)目,評估131I對野生型和重組肝癌細胞的殺傷作用。6、移植瘤模型建立。ACI大鼠側腹部接種野生型和/或重組肝癌細胞,待腫瘤長至直徑0.6-1.0時用于核素生物分布和治療研究,腫瘤長至直徑1.0cm時用于核素顯像研究。7、生物分布。研究不同給