去卵巢SD大鼠血管及腰椎基質(zhì)Gla蛋白的表達及調(diào)節(jié)研究.pdf

1、目的：
　　 觀察去卵巢Sprague-Dawley大鼠血管及腰椎基質(zhì)Gla蛋白(MGP)表達及骨質(zhì)疏松治療藥物雌激素、維生素K2、甲狀旁腺激素對其表達的調(diào)節(jié)作用，探討MGP在血管鈣化和絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥共同發(fā)病機制中的作用。
　　 方法：
　　 60只10月齡雌性SD大鼠，隨機分成5組，假手術組、去卵巢(OVX)組、去卵巢加雌激素干預(E)組、去卵巢加維生素K2干預(VK2)組，去卵巢加PTH干預(PTH)組，每

2、組12只。E組手術3周后給予苯甲酸雌二醇肌肉注射(0.2mg/kg，隔天一次，持續(xù)12周)，VK2組手術3周給予維生素K2灌胃(30mg/kg，每周5次，持續(xù)12周)。PTH組手術3周后給予PTH皮下注射(20ug/kg，每周3次，持續(xù)12周)。各組大鼠在術前及用藥后每3周留取血清及尿液。18周后處死大鼠，HE染色觀察子宮、血管及腰椎組織變化，用DEXA測定大鼠腰椎的骨密度；酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測血清及尿液中MGP的量及雌激素

3、的變化；原子分光光度計檢測各組血管總鈣含量；免疫組化法觀察血管及腰椎未羧化MGP(ucMGP)的表達，Von Kossa染色觀察動脈鈣化；熒光實時定量PCR擴增MGP基因，觀察血管及腰椎MGP mRNA的表達水平。
　　 結(jié)果：
　　 (1)骨質(zhì)疏松動物模型構(gòu)建：去卵巢18周后，OVX組的子宮內(nèi)膜萎縮，血管鈣化程度及腰椎骨小梁結(jié)構(gòu)破壞最明顯，而假手術組無明顯改變，雌激素、VK2組及PTH組介于兩者之間。骨密度方面，維生素

4、K2組與OVX組之間無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，雌激素及PTH組與OVX組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。血中雌激素水平方面：去卵巢前各組無明顯差異(P>0.05)，處死前OVX組及藥物干預組明顯降低，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。假手術組無明顯變化。(2)血清及尿液中MGP含量變化：各組大鼠血清及尿液中MGP含量在去卵巢前，無明顯差異(P>0.05)，去卵巢后，假手術組血清MGP含量無明顯變化；其他各組均下降，OVX組最顯著，

5、用藥后6周，OVX組血清MGP含量無明顯變化，而各藥物干預組含量逐漸上升，藥物干預后3至12周除假手術組外的其他各組尿液中MGP的含量均下降，OVX組最顯著，各組間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。處死時藥物干預組的尿液MGP含量上升，與OVX組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(3)血管總鈣含量測定：OVX組較其他各組血管總鈣含量明顯升高(P<0.01)，假手術組和其他各組比較，血管總鈣含量最低(P<0.01)，藥物干預組的血管總鈣含

6、量介于OVX組及假手術組之間。VK2組及PTH組高于雌激素組(P<0.05)。(4)免疫組化切片及血管Von Kossa染色：血管ucMGP在血管鈣化嚴重部位表達明顯。腰椎OVX組ucMGP陽性表達明顯，其他各組表達不明顯。(5)熒光實時定量PCR：血管中MGP mRNA表達以假手術組最高，與其他各組比較差異有顯著性(P<0.01)；OVX組表達量最低，與其他各組比較差異有顯著性(P<0.01)。各藥物干預組之間稍有差別，但無統(tǒng)計學意義

7、(P>0.05)。腰椎中MGPmRNA表達量：OVX組較其他各組明顯增高差異有顯著性(P<0.01)，假手術組較其他各組降低差異有顯著性(P<0.01)。各藥物干預組之間稍有差別，但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(6)相關性分析：血管總鈣含量，骨密度，血管及腰椎中MGPmRNA相對表達量之間具有相關性。
　　 結(jié)論：
　　 (1)雌激素水平下降是絕經(jīng)后女性血管鈣化及骨質(zhì)疏松發(fā)生的一個重要致病因素。(2)MGP基因及蛋白的