基于生物免疫傳感器建立金黃色葡萄球菌快速檢測方法的初步研究.pdf

1、目的：本研究將以色素體Chromatophores和F0F1-ATP合酶為工具，結(jié)合熒光技術(shù)研究一種生物免疫傳感器，初步建立靈敏、快速、低成本檢測金黃色葡萄球菌的方法，為婦產(chǎn)科臨床感染病的診斷提供新技術(shù)。
　　 方法：將培養(yǎng)的嗜熱菌超聲破碎獲得帶有F0F1-ATP酶色素體，pH變化敏感的熒光物質(zhì)F1300標(biāo)記到F0F1-ATP酶的載體色素體的內(nèi)表面，然后在F0F1-ATP酶上連接β亞基抗體-生物素-鏈親和素-生物素-金葡菌菌抗體

2、復(fù)合體，得到可以捕獲金黃色葡球菌的免疫生物傳感器。傳感器上負(fù)載菌量不同，引起的酶活性變化不同，酶活性變化又引起色素體內(nèi)pH變化，最后通過F1300的熒光強(qiáng)度變化來檢測菌量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS10.0系統(tǒng)統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理。
　　 結(jié)果：
　　 1．提取的chromatophores平均直徑約為70nm,其水溶液中測得在860nm的標(biāo)志峰。
　　 2. F1300-ch上負(fù)載的F0F1-ATP酶水解活性為42.

3、56μmol/mg·min。
　　 3. F1300熒光強(qiáng)度變化與ATP合成過程的H+轉(zhuǎn)運(yùn)，即與F0F1-ATP酶的活性密切相關(guān)。
　　 4. F0F1-ATP酶的β亞基結(jié)合上不同的負(fù)載，對(duì)F0F1-ATP酶驅(qū)動(dòng)的質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)的活性變化的影響，可以通過監(jiān)測F1300的熒光強(qiáng)度得以反映。
　　 5．建立菌液濃度與熒光值的相關(guān)性曲線。隨著濃度增加，熒光值逐漸下降。在103-105CFU/ml呈現(xiàn)良好的梯度關(guān)系。